甾体激素是一类由细胞色素P450酶催化胆固醇形成的环戊烷多氢菲结构化合物。类固醇激素分为四大类:孕激素、皮质类固醇、雌激素和雄激素。类固醇激素在调节人体代谢、维持体内环境稳定、生长发育和生殖行为等方面发挥着重要作用。
甾体激素含量低，结构相似，在生物体内具有多样性类固醇激素的准确定量需要一种高度灵敏的仪器和一种能够产生精确结果的方法。目前检测类固醇激素的样本主要有血液样本、毛发、尿液、唾液、子宫内膜、等。
分析方法的建立包括样品处理和分析方法的选择。好的样品前处理方法可以富集目标组分，消除或减少基体干扰，提高灵敏度，但反过来容易引入误差，延长分析时间。此外，合理的分析方法可以为实验研究提供更准确的结果，保证结果的可靠性。
1.样品处理方法
血液中类固醇激素的分析方法分为直接处理和衍生化处理。直接加工的主要方法有蛋白质沉淀(PP)、液-液萃取(LLE)和固相萃取(SPE)。衍生化方法主要用于特别难以电离的化合物，如雌二醇、雌酮和孕烯醇酮，特别是检测要求高的特殊临床样品。
2.检测方法
有些类固醇激素在血液中处于低水平，因此需要使用敏感的检测方法。Creative蛋白质组学常用的类固醇激素测定方法包括以下几种。
高效液相色谱法(HPLC)是一种常用的对沸点高、稳定性差、相对分子质量大的有机化合物进行定性和定量分析的非破坏性分析方法。但其选择性差，灵敏度低，且样本量大，往往不能满足检测目的。对于体内含量较低的甾体激素，HPLC不能满足检测要求，目前常用串联质谱法。
GC-MS具有灵敏度高、选择性好、能量效率高、速度快等特点。它能实现类固醇激素的高分辨率检测，并能提供快速、重复性好的结果，因此被广泛应用于类固醇激素的分析。
由于甾体激素不挥发，GC-MS/MS分析通常需要衍生化，这会增加甾体激素的挥发性和热稳定性。在特殊情况下，如测定细胞培养基中的睾酮含量和废水中的雌激素，不需要衍生化。衍生化反应通过改变化合物的官能团来改变物质的化学结构和性质，也可以显著提高待测物质的响应值，达到更高的灵敏度。然而，血液样本中含有大量成分复杂的生物基质，使得GC-MS/MS分析更加复杂。
高效液相色谱-质谱/质谱是一种强大的分析技术，利用高效液相色谱和质谱的优势，结合两者提供优越的选择性。优化后的HPLC-MS/MS可对高沸点、难挥发和热不稳定化合物进行准确、精确的分离和测定。
高效液相色谱-质谱联用技术已成为类固醇激素测定的一种有利技术。高效液相色谱-质谱/质谱联用技术用于内源性甾体激素分析，大大减少了样品和试剂的消耗和前处理时间，也避免了衍生化步骤反应过程中的副反应和损失。然而,对于一些极难电离的荷尔蒙和满足样品的测定与非常低的水平,这也可能需要丰富和集中的帮助下他们一个转换离子源或通过使用特殊的列和SPE列满足检测要求。