霰弹枪脂多媒体

脂多元族学提供了对生物,组织或细胞和与它们相互作用的分子中的脂质的系统分析。霰弹枪脂素在更大的规模上追踪生物系统中的脂质网络,允许研究脂质识别,量化和相互作用。

Lipidomics研究重点关注脂质相互作用的变化。这包括脂质成分种类、脂质含量和了解它们在细胞腔内外的运动等信息。Shotgun脂质组学是Han和Gross在2003年首次提出的。他们结合尖端技术,对生物体内复杂的脂质组成进行了定性和定量分析,并通过研究脂质参与细胞内不同功能的分子机制,进一步探索了脂质的分子机制。从那时起,大规模的脂质组学就开始了。到2005年,使用更成熟的Shotgun脂质组学技术,可以分析属于20多种不同脂质类的数百种脂质分子,该技术覆盖了超过95%的细胞内脂质成分。尽管覆盖率很高,但仍有许多低丰度的脂质分子未被当前的散弹枪脂质组学技术很好地定位。

霰弹枪脂多媒体生物样品采用常规脂质提取方法,在有效的源内分离的基础上,根据脂质离子或片段不同的固有荷电性质选择合适的多维阵列分析方法,实现对目标脂质分子的表征和定量。

Lipidomics工作流。Lipidomics工作流。

源内分离、多维质谱和计算机分析相结合已成为脂质组学研究中最具代表性的分析技术之一。

intrasource分离

源内分离的基本原理是利用电喷雾离子源,在高电位(通常为4千伏)作用下,将样品中的生物分子分解成不同的带电离子,然后在类似电泳的过程中选择性分解。由于不同的脂质分子具有不同的电离性质,其电荷程度在很大程度上取决于其极性头基团的化学特性。因此,可以通过源内分离对脂质提取物中的脂质分子根据其固有电荷进行初步分离,后续的分析步骤可获得脂质生物样品中一系列脂质分子组成的质谱图。

脂质分子的多维质谱鉴定

质谱是通过测量离子质量与电荷比(M / Z)来定性分析物质。基本方法是在离子源的作用下电离样品的组分,以产生具有不同质量与电荷比的带正电荷的离子。离子束形成在加速电场中,然后进入质量分析仪。在不同作用方向上的电场和磁场的速度分散效应用于有效地将离子与质谱谱中不同的质量 - 电荷比分化,从而确定它们的质量。通常,主要离子质谱用作一维色谱图。在此基础上,借助于测试设备的实验条件的一系列渐进变化用于引入额外的尺寸。

脂质分子的质谱定量

在质谱法定义鉴定之后,定量分析可以进一步提供有关脂质分子的更有价值的信息。鉴于各种脂质分子及其紧密的元素组成,量化通常需要两步过程。首先,在13℃下选择具有高丰度和非重叠质谱峰的分子量和非重叠质谱峰,并根据预选的内部参考标准的比例量化分子。然后通过将预选的内标作为全部或一些量化分子物种的新参考添加预选的内标,通过单尺或多尺寸的质谱峰值来跟踪具有相对低丰度和重叠质量光谱峰的其他脂质分子。通过消除背景噪声和滤波重叠的分子信号,两步量化过程允许分析的线性测量范围的显着延伸。

数据处理和信息分析

基于多维质谱的散弹枪脂质组学分析可以产生大量的脂质分子鉴定的片段信息。这些结果的生物信息学处理还需要结合各种脂类的物理特性、化学性质等信息。

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