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糖基化是在哺乳动物中最重要的翻译后修饰。有糖基化,O-糖基化和N-糖基化的两个主要类别,根据该聚糖 - 肽连接位点。最近,研究表明,O型甘露糖多糖,O型聚糖,起着大脑和肌肉的发育有重要作用。缺乏O型甘露聚糖导致先天性肌营养不良症,或α-营养不良。其中最有名的改性O型糖蛋白的是α-肌营养不良(α-DG)在人,这是主要成分的肌肉肌营养不良蛋白糖蛋白复合物(DGC)从骨骼肌膜隔离。α-DG被高度糖基化的,其聚糖戏剧在层粘连蛋白,神经毒素,串珠素和凝集素的以层粘连蛋白,神经毒素,G(LG)域和其他蛋白的结合中起重要作用。
目前,根据的GlcNAc的到曼残基结合位点,这些多糖可分为三个核心O形曼结构:芯M1糖胺(GlcNAc-β-1-2Man),核心M2 [型GlcNac-β-1-6(的GlcNAc-β-1-2)曼]和核心M3糖胺(GlcNAc-β-1-3GlcNAc-β-1-4Man)。芯M1和M2芯的外周的结构是由一系列糖基转移酶,如半乳糖基转移,唾液酸转移酶,葡萄糖醛酸,sulfonyltransferase和α-1mer -3-岩藻糖基在高尔基体的合成。新颖的完整芯M3结构最近被发现,所述特性包括:1)的人的6位上的磷酸化;2)串联式磷酸盐5-核糖醇(Rbo5P)结构;3)重复3GlcAβ1-3Xylα1结构;4)单GlcAβ1-4Xylβ1-4单元。
图1所示。这三种类型的O型甘露途径。
o -甘露糖聚糖的分析通常采用LC-MS, LC-MS通过过甲基化将所有羟基转化为甲基醚,并通过其羧基的甲基酯化使唾液酸稳定,因此可以以正模式分析o -甘露糖聚糖。将过甲基化的o -甘露糖聚糖输注到MS装置中即可分析o -聚糖。
图2所示。在血清共同glycoproteomic分析的工作流程。
必须避免反复冻结和解冻样品。在室温下血清样品在收集管中沉淀30分钟,然后将其运输到离心管,并以8000rpm离心5分钟。离心后,将上清液同等分为500μl/样品的冷冻管。
采集后必须立即加入抗凝剂和防腐剂,然后在-80°C下冷冻。
尿液样本应均匀分成离心管,每管1ml,每管加入1/100 (w/v)叠氮化钠,-80℃保存。
样品采集后应立即用液氮冷冻,并运至-80℃保存。
细胞活性应立即终止,以保持细胞的完整性。
一般来说,为了确保足够的样本来满足整个项目,需要尽可能多地提供单一样本的体积。剩余的样本将免费存放一年并在必要时随时返回。所有样品都需要在-80°C下储存和运输,并尝试使用表面活性剂(SDS,Triton-X)和无机盐。
在单个组中不少于30例重复临床样品。
动物样品在单个组中不少于9例。
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参考文献