花生四烯酸的检测方法

花生四烯酸是什么?

花生四烯酸(AA)是一种全顺式5,8,11,14-二十碳四烯酸，是一种不饱和脂肪酸。它是生物体内含量最多、分布最广的多不饱和必需脂肪酸之一。在花生四烯酸级联中，AA在生物体中有三条主要的代谢途径:通过环加氧酶(COXs)、脂加氧酶(LOX)或细胞色素P-450 (CYP-450)产生前列腺素(PG)、血栓烷(TX)和白三烯(LT)或羟基脂肪酸(OHFA)。其中cox x分为三种形式:COX-1(构成型)、COX-2(丝裂原诱导型)和COX-3 (COX-1的变体)。

• 前列腺素代谢物(PGs): PGs是由COXs介导和AA转化产生的重要炎症介质，也是调节免疫和炎症等生理功能的重要脂质介质。pg增加毛细血管通透性，增强由其他炎症条件引起的水肿，并增强由组胺和缓激素样物质引起的疼痛和肿胀。
• 白三烯代谢物:白三烯代谢物是一类具有生物活性的化合物，在结构上包含三个共轭双键，属于脂类物质家族。它们在过敏反应、炎症和增殖相关疾病过程中起主导作用，在过敏性哮喘疾病的发病和进展中尤其突出。
• 血栓烷代谢物(TXs): AA被过氧化物酶还原产生PGH2, PGH2又被血栓烷合成酶还原产生TXs样物质。TXs由血小板产生，具有凝血小板和收缩血管的作用。与pg一样，TXs包括多种具有不同结构功能的化合物(血栓烷衍生物)，如TXA2, TXA3, TXB1, TXB2, TXB3，等．
• 羟基脂肪酸代谢物(OHFAs): AA也可以通过CYP450酶途径产生OHFAs代谢物:环氧二碳四烯酸(EET)、羟基二十碳四烯酸(20-HETE)、二十碳四烯酸(ETE)、二羟基二十碳四烯酸(DHET)、等．

AA级联的说明性概述et al。, 2015)

AA通过磷脂酶A2s从膜磷脂中释放，参与了与细胞损伤、炎症和凋亡相关的病理生理事件。因此，准确的定性和定量分析对aa相关疾病的发生机制、诊断和预测具有重要意义。

花生四烯酸试验方法

生物样品中花生四烯酸及其代谢物的测定方法主要有气相色谱-质谱(GC-MS)、液相色谱-质谱(LC-MS)、液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS /MS)、液相色谱-电喷雾质谱(LC-ESI/MS)、液相色谱-核磁共振(LC-NMR)毛细管电泳-质谱(CE-MS)和酶联免疫吸附试验(ELISA)。

GC-MS分析通常需要更复杂的前处理步骤，包括样品纯化和衍生化。这种方法不适用于热不稳定的代谢物的分析，如环氧二烯四烯酸(EETs)。

酶联免疫吸附试验(ELISA)是应用最广泛的技术，主要关注终点代谢组学(PGE2, LTE4等)。但该方法过于复杂，重复性差。

LC-MS/MS作为代谢组学的主要技术工具，已成为测定生物样品中小分子代谢物(相对分子质量小于1500)的有效工具。该分析技术在AA检测中的发展和应用一直是研究的热点。

LC-MS分析策略不需要过多的样品前处理方法。生物样品经蛋白沉淀、液-液萃取或固相萃取纯化富集后，可直接用于LC-MS检测分析。LC-MS/MS是代谢组学中用于内源性化合物定量分析的主要技术，具有分析时间短、自动化程度高、样品制备(结节化)最少的优点，适用于相对分子质量和极性范围大的内源性分析物。它已被广泛应用于AA代谢产物的定性和定量分析以及它们的结构类似物，类固醇和其他成分。

参考

1. 韦伦伯格，奥斯特曼，a.i.，和舍布，n.h.(2015)。花生四烯酸级联的目标代谢组学:氧脂素的LC-MS分析的现状和挑战。分析与生物分析化学，407(10)，2675-2683。

相关章节

代谢组学服务

脂质代谢服务

有针对性的代谢组学服务