相对和准确的分子量测定方法

分子量是有机化合物的基本物理化学性质,是化合物化学式中各个原子相对原子质量的总和。正确的分子量通常代表所测有机化合物和生物大分子的正确结构。分子量是多糖、多肽、蛋白质等鉴定的主要参数。

分子量测定主要有两种类型:相对分子量测定和精确分子量测定。常用的测定方法有凝胶渗透色谱法(GPC)、尺寸排除色谱法(SEC)、质谱法、SDS-PAGE等。

相对分子量测定

多糖和多肽的相对分子量通常用凝胶渗透色谱法(GPC)或尺寸排除色谱法(SEC)测定。该方法不仅提供了聚合物样品的平均分子量值,还提供了聚合物样品中分子量分布的信息。它还可以与其他探测器(如光散射或粘度探测器)相结合,以提供有关溶液中分子的结构和大小的信息。

蛋白质和多肽的相对分子量也可以用SDS-PAGE方法测定。其原理是在电泳体系中加入SDS,打开蛋白质的氢键和疏水键,并与蛋白质分子结合,使电泳迁移率仅依赖于分子大小作为一个因素。因此,通过对标准蛋白的分子量和迁移率的对数所做的标准曲线,可以得到未知分子的分子量。

准确的分子量测定

蛋白质、多肽、氨基酸、糖蛋白和其他化合物的确切分子量通常由质谱法测定。质谱分子量分析结合肽图谱可以帮助确定正确的氨基酸序列。这可以通过基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱测试或使用其他高分辨率液体质量的全扫描采集来完成,然后使用反褶积软件进行测量。

Creative Proteomics拥有一支经验丰富的专家团队和先进的设备,为制药和科研用户提供专业可靠的分子量测定服务。

对于相对分子量测定需求,Creative Proteomics提供GPC柱和SEC柱分离,紫外检测器,差分检测器,光散射检测器,粘度检测器,并通过液相色谱仪进行GPC软件分析。配有电泳仪,配备夹层式竖板电泳槽和薄膜电泳槽,用于多糖、多肽和蛋白质的相对分子量测定。

准确的分子量测定需要时,Creative Proteomics配备了高分辨率质谱仪Q Exactive HF,带有Orbitrap探测器,并通过反褶积软件BioPharma Finder进行反褶积,能够准确测定蛋白质,多肽,氨基酸,糖蛋白等的分子量。精密度达到1 Da,与凝胶渗透色谱(GPC)、SDS-PAGE等传统测定方法相比,精度大大提高,可满足蛋白质表征和蛋白质修饰分析的需要。

LC-MS法准确测定分子质量

LC-MS法准确测定分子质量[1]

参考

[1]利彭斯,J. L., Egea, P. F.等(2018)。快速LC-MS法准确测定膜蛋白和疏水蛋白的分子量。分析化学,90(22),13616-13623。

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