创意蛋白质组学博客

概括

关于蛋白质磷酸化有很多问题。用于检测没有磷酸特异性抗体的细胞内蛋白磷酸化的方法是该领域中最受欢迎的问题。该帖子将介绍检测细胞内蛋白磷酸化的方法。

身体

如果没有磷光体特异性抗体，我们如何检测细胞内蛋白质磷酸化？这是方式。

最受欢迎的方法是^32.P放射性标签。为了让^32.p进入蛋白质，可以用放射性地处理细胞^32.标记为ATP。2小时后，您可以在破裂细胞后提取蛋白质。然后你可以做到2D电泳检测磷蛋白。然而，辐射有其自身的缺点。因为可以在少量放射性磷酸盐添加一些蛋白质，所以它们不易检测到。已经检测到的蛋白质可以用串联质谱测序鉴定。如果有必要分析磷酸化地，则需要收集具有放射性的肽以进行序列分析。当然，这是指分离的磷蛋白。

用于检测磷蛋白的其他方法是色谱法。分析磷蛋白的常见方法是用胰蛋白酶消化磷蛋白，得到特定的多肽片段，然后通过反相色谱柱与电喷雾电离分离质谱。

免疫沉淀

目前，用于富含磷酸化酪氨酸，丝氨酸和苏氨酸蛋白的抗体已经商业化。但只有抗磷酸酪氨酸抗体在检测磷酸化蛋白方面非常有效。

化学修饰

通过使用磷酸盐的化学改性，还可以获得磷蛋白。有两种化学改性方法---β2消除反应和碳二亚胺的缩合反应。

质谱

MALDI2MS分析已成功用于鉴定非磷酸化蛋白质。该分析主要依赖于获得肽质量指纹识别以获得蛋白质的序列信息。近年来，串联质谱也适用于分析磷蛋白的分析。它不仅可以检测磷蛋白，还可以确定磷蛋白的地方。

我们提到了许多用于检测磷蛋白的方法。但是，没有一个独立的方式来实现这一目标。为此，应收集许多材料。