创造性的蛋白质组学的博客

概括

关于蛋白质磷酸化有很多问题。如何在没有磷酸化特异性抗体的情况下检测细胞内蛋白磷酸化是目前该领域最热门的问题。这篇文章将介绍检测细胞内蛋白磷酸化的方法。

身体

如果没有磷光体特异性抗体，我们如何检测细胞内蛋白质磷酸化？这是方式。

最流行的方法是³²P放射性标记。为了让³²P进入蛋白质，你可以用放射性处理细胞³²P-labeled ATP。2小时后，可以裂解细胞提取蛋白质。然后你可以做二维电泳检测磷蛋白。然而，辐射有它自己的缺点。因为一些蛋白质可以加入少量的放射性磷酸盐，所以它们不容易被检测到。已检测到的蛋白可以用串联质谱测序进行鉴定。如果需要分析磷酸化的位置，则需要收集具有放射性的多肽以进行序列分析。当然，这指的是分离磷蛋白质．

另一种检测磷酸蛋白的方法是色谱法。分析磷蛋白常用的方法是用胰蛋白酶消化磷蛋白，得到特定的多肽片段，然后用反相柱结合电喷雾电离进行分离质谱分析．

免疫沉淀反应

目前，用于富集磷酸化的酪氨酸、丝氨酸和苏氨酸蛋白的抗体已经商业化。但只有抗磷酸化酪氨酸抗体对磷酸化蛋白有较高的检测效率。

化学改性

通过对磷酸盐进行化学修饰也可以得到磷蛋白。化学修饰有两种方法:β2消除反应和碳二亚胺缩合反应。

质谱分析

MALDI2MS分析已成功用于鉴定非磷酸化蛋白。这种分析主要依靠获得肽质量指纹图谱来获得蛋白质的序列信息。近年来，串联质谱联用MALDI2MS也被应用于磷蛋白的分析。它不仅可以检测到磷蛋白，还可以确定磷蛋白的位置。

我们已经提到了很多检测磷蛋白的方法。然而，没有独立的方法来实现这一目标。为此目的，应该收集许多材料。