肽图谱的定义和原理
蛋白质和多肽的分子量和氨基酸组成，以及作用于特定肽链的特定内切酶，被用于肽图．多肽被内切酶切成小片段。通过一定的分离和检测手段形成特征指纹。肽图绘制有助于肽的结构研究和表征。
肽映射的过程
1.获得蛋白质样品
2.使用6种蛋白酶(Trypsin, Chymotrypsin, Asp-N, Glu-C, lysc, Lys-N)消化和识别靶蛋白。
在蛋白质样品鉴定过程中，用胰蛋白酶消化蛋白质，鉴定出的肽覆盖率约为60%。为了获得目标蛋白的全部序列信息，可以选择蛋白质鉴定中常用的6种蛋白酶(Trypsin、Chymotrypsin、Asp-N、Glu-C、lysc、lysn)进行酶切鉴定，通过多肽之间的拼接可以确定100%的蛋白质序列。
3.采用nano-flow UPLC-MS / MS分析样品。
在肽图中，每个肽必须完全分离成一个单峰。然而，蛋白质水解产物非常复杂，需要选择合适的色谱方法和仪器来分离目标产物。Creative Proteomics使用超高效液相色谱(UPLC)分析多肽。与高效液相色谱(HPLC)相比，UPLC具有更好的分辨率和灵敏度，以及更好的肽图谱绘制能力。小颗粒填充有助于UPLC的高分辨率，产生超窄色谱峰。同样，肽分离中所使用的填充材料的表面化学性质可以产生极好的峰形。
创造性蛋白质组学主要使用MALDI-TOF质谱对纯化的多肽进行分析。进行MALDI TOF MS时，将样品与等量的基质溶液混合，或将基质溶液置于目标样品上。溶剂蒸发后，样品与基体形成共晶。用激光作为能量源对晶体进行辐射。基体从激光中吸收能量来吸附样品。在基质和样品之间的电荷转移使样品分子电离。样品离子进入飞行时间质谱仪进行质谱分析，形成质谱。通过软件分析比较，筛选确定具体指纹。当MALDI-TOF分析肽混合物时，它可以容忍适当数量的缓冲液和盐，几乎每个肽片段只产生单电荷离子。质谱中的离子与肽和蛋白质的质量之间存在一对一的对应关系，这有助于质谱数据分析。
4.将肽覆盖/肽谱的完整序列与所提供的理论序列进行比较，得到最终的比较结果。
肽图谱的应用
- 广泛应用于基因工程药物的质量控制
- 重组单克隆抗体药物的氨基酸结构分析
- 生物药物鉴定。
- 原药材相似度及质量研究
- 鉴定重组蛋白结构的完整性和准确性
参考文献
1.Moore R, Samonig M.高通量，高分辨率肽图。基因工程与生物技术新闻， 2016, 36(12): 20-21。
2.哒哒奥奥，赵颖，等．高分辨率毛细管区带电泳质谱多肽定位治疗蛋白:单克隆抗体和抗体-药物偶联物的多肽恢复和翻译后修饰分析。分析化学， 2017, 89(21): 11236-11242。