细胞迁移是活细胞的一个重要特性,是细胞从一个地方移动到另一个地方的过程。细胞可以以单细胞形式迁移,也可以通过标记为集体迁移或细胞流动的多细胞运动进行迁移。单细胞迁移可分为变形虫运动(其特征是细胞呈圆形、椭球体运动,无局灶黏附和细胞附着,但有辅助作用)推进气泡)和间充质运动(涉及细胞外基质,细胞骨骼收缩性和细长的纺锤体状细胞体的强焦点。集体迁移是其特征是细胞队列通过ECM运动,并保存了功能细胞-细胞连接。对于正常的发育,免疫反应和疾病过程至关重要,例如癌症转移和炎症。
有许多方法可以研究细胞迁移,例如Transwell迁移测定(Boyden腔室测定),伤口愈合测定(划痕测定),细胞排除区测定(鸭嘴蛋白迁移测定),围栏测定,微载体珠子测定,白细胞迁移琼脂糖技术测定(LMAT测定),球形迁移测定,单细胞运动性测定,等。我们将详细介绍两种常用方法。
Boyden室试验
Boyden室测定适用于对细胞的不同迁移反应的定量分析,例如趋化性,触觉,邻辐射和趋化因子。这种相对可靠和节省时间分析允许一对一具有多功能性在进行运动实验中并允许细胞运动性分析在此基础上不考虑细胞增殖和细胞间相互作用的影响。
Boyden室测定基于由A分开的两个中填充隔室的腔室。微孔膜。用于诱导趋化性或触觉细胞的响应,将引诱剂添加到腔室的下部隔室中。在诱导趋化因子因子的诱导时,在膜的两侧加入等浓度的试剂。并且细胞置于上隔室中,并且可以通过膜的孔迁移到下部隔室中。在适当的孵育时间之后,两个隔室之间的微孔膜被固定并染色,并且确定已经迁移到下侧的细胞的数量。
Boyden室测定有几个步骤,包括细胞制备,装载和组装腔室,染色膜,计数细胞,并清洁腔室。在Boyden室测定期间,需要考虑一些重要因素,例如在腔室上装载的细胞数,膜的孔径,引诱剂的类型和浓度以及孵育时间。
体外伤口愈合测定(划痕测定)
该方法是一种要求低、成本低的检测方法,可用于研究细胞在二维表面上的迁移,并模拟伤口愈合过程中的细胞迁移在活的有机体内。在该测定中,当细胞生长到单层状态时,在单层细胞中形成空白区域,称为“划痕”。划痕边缘处的细胞将逐渐进入空白区域以允许“划痕”愈合。因此,方法中涉及的基本步骤包括在小区单层中创建“划痕”,在小区迁移期间以规则间隔在开头和规则间隔中捕获图像,以关闭划痕,并将图像进行比较来量化单元格的迁移率。
这种方法具有一些优点,例如模仿在某种程度上迁移细胞在活的有机体内适合研究细胞与细胞外基质(ECM)相互作用和细胞-细胞相互作用对细胞迁移的调控。它还与其他技术如微注射或基因转染相结合,以评估外源基因表达对单个细胞迁移的影响。然而,在体外划痕测定有一些缺点和限制。它需要比其他一些细胞迁移测定表现相对较长的时间,并且需要相对大量的细胞和化学品。
此外,划痕的厚度往往不均匀,因此在伤口闭合之前,细胞的迁移速度往往会加快。塑料表面或ECM基板以不受控制的方式刮掉,机械细胞损伤可能引起伪影。为了解决这些问题,人们开发了新的技术,以确保具有确定边缘的伤口大小不变,例如电池-衬底阻抗传感(ECIS)可以产生确定大小的伤口区域,而不会有显著变化。
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引用:
- 克拉姆人N.,walzl a,unger c等人。体外细胞迁移和侵袭测定。突变研究中的突变研究/评论,2013,752(1):10-24。
- 梁春春,ParkA Y,关建林。体外划痕法:一种简便、廉价的细胞迁移分析方法[J]。自然学报,2007,2(2):329。
