虽然代谢组学是蛋白质组学领域最有力的研究方法之一,但设计一个成功的代谢组学实验仍然是最重要的过程。在引入实验之前,我们首先要知道它的样本类别和样本数量。
哪些样品可以检测代谢组学服务?
代谢组学的目标物质是小分子代谢物,它可以作为各种代谢途径的底物和产物。其样本主要包括尿液、血浆或血清、唾液以及细胞和组织的提取物。其他如植物提取物、真菌提取物、微生物提取物、脑脊液、淋巴、昆虫血淋巴、羊水、卵泡液、膝关节滑膜液、眼泪、精液、粪便、肠道内容物提取物等也应用于本实验。
代谢组学能检测多少物质?
不同的检测平台具有不同的灵敏度和偏差。一般来说,核磁共振的灵敏度最低,它可以检测和定性小于100的物质,但它具有简单、无创的特点和定量能力。质谱的灵敏度比核磁共振高约1000倍。测定血清样品的定性材料气相色谱质谱分析约300份,尿液样本约600份,其他样本在100份左右。对于整个2D GC-MS,物质的数量一般在1000以上。而LC-MS的频率一般在100以上。
如何设计实验?
可供研究人员参考:
1.平行样品的植物,微生物应6至8。模型动物应在10个左右。临床标本需要20到30份。
2.样品不能淤积或反复冻融,血清/血浆不能溶血。此外,如果使用血浆,研究者应使用肝素钠抗凝,因为EDTA抗凝效果不够好。
3.对于核磁共振,应该没有酒精或麻醉剂。尿液、粪便、肠内容物标本也需要叠氮化钠。
如何处理样品?
微生物和细胞样本:代谢活动的快速失活(猝灭),保持细胞不分裂。
动物体液:取样后加入抗凝剂、防腐剂、立即冷冻(-80℃)进行快速预处理。
植物样品:经快速冷冻(液氮)后,再转移至-80℃保存,200mg /箱。
血清样本:500UL /案例(不少于200ul /案例),必须避免反复冻融。
尿样:1ml /例。
这些都是一些基本资料和一些参考资料代谢组学样本。你也可以提出你的建议。
