如何制备细胞新陈代谢样品

细胞的新陈代谢总结

细胞代谢通常定义为细胞内和膜小分子代谢物的集合。代谢物,其反映器官,组织或细胞表型的近似浓度,参与细胞内方法的各种变化。细胞代谢,一种新领域,可以解决基本的生物学问题,并允许监测细胞内代谢现象。该帖子将介绍用于制备细胞新陈代谢样品的提示。

以下方法用于检测具有细胞代谢方法的LC / MS和GC / MS。

准备
玻璃管(带帽):
1.管/每个样品
2.小​​瓶(带帽):2个小瓶/每个样品(装载介质,破碎后加载的细胞上清液)
3.15 ml离心管:2管/每个细胞样品的不良状态(负载肉汤,负载PBS洗)
4. 1.5 mL离心管:1个管/每个样品(用肉汤样品,如果介质不需要进行测试,你不能这样做)
5. 2.0ml管

代谢物的细胞破坏和提取:


1.从培养箱中拿出盘,用显微镜观察细胞状态。

(1)细胞状态不坏;
(2)细胞,非牢固地连接到墙上,具有更多的悬浮液状态。


2.收集细胞,它牢固地没有连接到墙壁上:


(1)将1ml移液管调节至750μl,将1.5ml培养基进入EP管,丢弃剩余的肉汤(如果肉汤不用于代谢检测,则可以省略该步骤);
(2)使用原始培养基到移液体细胞,以除去未牢固的电池,然后将所有肉汤收集到15ml离心管,离心,将1.5ml培养基放入EP管中,丢弃剩余的肉汤(如果肉汤不用于代谢检测),则通过离心(第1行)获得的保留细胞。


3.收集不牢固的细胞:


(1)用PBS洗涤细胞,以除去盘子中的残留液体:1ml一次,洗涤六次以无色。乳液应保留在另一管(管2),离心,保留细胞;
(2)将1ml PBS溶液加入盘子上,均匀蔓延。用细胞刮刀刮擦细胞,并刮到相同的位置,将电池悬浮液吸入玻璃离心管(管3);使用另外的0.5mL PBS溶液在盘中冲洗残留细胞。并确保所有细胞离心管,以在玻璃试管(管3)中获得1.5ml细胞悬浮液。
(3)在1.5ml悬浮液中使用管3从管1和管2收集细胞基团。
(4)将混合物转移至2mL离心管,离心,应保留细胞。

这些是收集细胞和培养液样品的主要步骤。

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细胞新陈代谢
LC / MS.

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