总结
实验对科学家来说是最重要的。然而,实验的成功受到许多因素的影响。那么我们如何在实验中避免错误,实现我们的目标是最大的问题。下面我将介绍蛋白质阵列测序过程中常见的错误。如果你正面临这些问题,你现在是幸运的。
蛋白质阵列测序的过程
第一步是分裂多肽链
由多条多肽链组成的蛋白质分子在第一步就应该被分离。寡聚蛋白是由多个多肽链以非共价键连接而形成的。例如,血红蛋白是四聚体,二聚体是烯醇化酶;我们可以用8mol / L尿素或6mol / L胍盐酸盐分离多肽链(亚基)。第二步是确定蛋白质分子中多肽链的个数。你可以通过测量末端氨基酸残基数和蛋白质分子量之间的关系来确定多肽链的数量。其次是二硫键断裂。当多个多肽链通过二硫键交联时,可以先用过量的巯基乙醇在8mol / L尿素或6mol / L胍盐酸盐的情况下使二硫键进入巯基。然后可以确定多个多肽链中的氨基酸,计算氨基酸组分的分子比例。分析多肽链的n端和c端是非常重要的。 Polypeptides will break into a plurality of peptides. Then you can determine the order of the amino acid in peptides and the order of peptide in polypeptide chain. The last one is to determine the original location of disulfide bonds in polypeptide chain.
本实验设备
样品纯度应在97%以上;知道蛋白质的分子量;知道形成蛋白质的亚单位的数量;确定蛋白质的氨基酸组成,并根据分子量计算各氨基酸的个数;测定水解过程中氨的含量,计算酰胺的含量。
实验中的错误
首先是样品的纯度。如果样品的纯度在97%以下,这将影响实验结果。
我们有时会犯这个错误的原因是我们没有找到足够纯度的样品,或者实验前的样品被其他物质污染了。
在二硫键断裂的过程中,一些科学家总是忘记使用烷基化剂来保护巯基,以防再次氧化。然后下面的步骤就不能按顺序了。首先在过甲酸中进行处理,然后进行还原和氧化。
这两个步骤不能更改。
这种错误的发生是因为我们不够小心。这是主要的步骤,在这种实验中可能会出现一些错误。

