分析组蛋白修改的策略

什么是组蛋白?

在真核细胞中发现,组蛋白是将DNA包装成核肉的蛋白质。组蛋白H2A,H2B,H3和H4定义为存在作为形成八大核致核心的二聚体的核心组蛋白,其被约146bp DNA包裹。通过DNA和组蛋白H1连接核体以形成染色质纤维。因为它们在染色体组装中,组蛋白可以是翻译后修改调节基因的动态表达。

组蛋白修饰

组蛋白修饰,包括甲基化,乙酰化,磷酸化,ADP-核糖基化,泛素和亚群泛素,从N末端尾部开始并前进到球状结构域。这些修饰有助于其他蛋白质与DNA的结合,导致调节基因转录的协同或拮抗作用。以组蛋白乙酰化为例。组蛋白乙酰化和脱乙酰化是动态平衡。组蛋白乙酰化的水平由组蛋白乙酰转移酶(帽)和组蛋白脱乙酰酶(HDACs)调节。帽子将CoA和乙酰-CoA的乙酰基转移到组蛋白N-末端的特异性赖氨酸残基。在组蛋白携带带负电的乙酰化基团之后,它与带负电荷的DNA相互排斥。因此,DNA缠结变得放松并且可以与转录因子结合以促进基因表达。

在不同蛋白质中准确地识别同一蛋白质或相同的修饰结构域内的不同修饰结构域可能是挑战。不同类型的修饰可以组合以调节蛋白质功能。因此,对组蛋白修饰的一项研究是组合蛋白和细胞生物学功能的组合翻译改性之间的关系。下面,我们将为组蛋白修饰分析提供两种分析策略。

组蛋白翻译后修改分析策略

1.组蛋白的提取和纯化

低渗裂解缓冲液加入到细胞颗粒中。通过机械剪切力裂解细胞膜,通过以低速离心分离细胞核。然后分解细胞核,并通过酸提取或高盐萃取获得的组蛋白。HPLC用于分离和纯化各种组蛋白组分以进一步分析。

2.质谱(MS)

A.下下MS

使用下下MS分析组蛋白修饰需要酶法水解特定蛋白酶,例如Gluc或Asp-N,或用已知序列的靶蛋白产生大肽片段或大分子肽。

B.自顶向下多发性硬化症

通常用于分析纯化的完全蛋白的自上而下分析方法可以在单一实验中快速检测修饰的组蛋白,而不需要酶水解。该方法有助于在单一实验中快速检测组蛋白修饰。

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