理论:
在蛋白质分离技术中对在蛋白质分离技术中进行非常重要的作用的等电聚焦（IEF）用于分离两性大分子与不同的等电点。
用两亲性载体和反对流介质填充电场。当电场作用时，由于两亲性载流子的运动，将在两极之间建立一个稳定的pH梯度。蛋白质分子或其他两亲性分子在这样的pH梯度下，由于其表面电荷在这个电场中的运动，会达到一个静电荷为零的区域。pH值可以看成是这个分子的pI。同时，聚焦于等电点的分子也会扩散。由于pH值的变化，只要远离等电点，分子就会带正电荷或负电荷。然后它迁移到。
仪器和试剂
材料:proetin样品
试剂:
聚丙烯酰胺，B聚丙烯酰胺，两性电解质，尿素，NP-40, teiton-100
电极溶液:1M磷酸(阳极液)，1M氢氧化钠(阴极液)
固定剂:TCA 100g，磺基水杨酸10g，溶于500ml，总体积1000ml
染色液:取0.35g考马斯亮蓝R-150溶于300ml脱色液中，加热至60-70℃，加入0.3g硫酸铜
脱色溶液:25%乙醇，8%乙酸溶于水中
样品缓冲液:1%两性碱，2% Triton X-100,9M尿素
步骤:
1.样品制备:
利用IEF样本缓冲提取待处理样本。
2.模具
执行两个洁净的特殊IEF玻璃自杀和反自杀反应。然后将玻璃片夹紧到位。
3.准备胶水
胶水成分:胶原液6ml(10%， 19/1)， 6-8%尿素，1ml两性碱(pH3.5-10)， 10% AP 60-80ul, TEMED 5 ul。
4.灌胶:灌胶入模具。
5.电泳:
凝胶凝固后，揭开上下玻璃片。将底部干净的塑料垫片置于电泳槽上。然后在塑料表面两侧放置浸有电极缓冲液的电极条。将镜片镜纸放置在胶水表面的任何位置。并把样品装在纸上。盖上盖子，用25W电泳。10分钟后，取下纸，停止电泳。然后继续电泳30分钟。然后在电流达到4mA时停止。
6.蛋白质等电点的测定
7.固定:取下塑料片，放入固定液中15分钟。
8.染色:取下塑料片，放入65℃的染料溶液中，直到出现条带。
9.去除背景后干燥保存。
等电聚焦法广泛应用于蛋白质等电点的测定和蛋白质分离。
特色服务：
蛋白质等电点的测定