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人体肠道菌群是一个对人体健康至关重要的大型微生物群落。HGM的维持取决于其以膳食和宿主多糖的形式利用复杂多糖作为营养来源的能力。因此,群落代谢这些多糖的机制对于理解该系统的生态学以及如何操纵它以有益于人类健康至关重要。拟杆菌门是控制HGM的两大门之一。这些生物多达20%的基因组以主要编码碳水化合物活性酶(如多糖裂解酶(PLs)、糖苷酶、糖运输和结合蛋白和碳水化合物硫酸盐酶)的基因形式致力于复杂的糖代谢。
图1所示。PUL CS/DS/HA降解糖胺聚糖的模型。
PUL组织中CS/DS/HA基因多态性拟杆菌的研究。PUL CS/DS/HA编码的酶的活性、位置和特异性示意图。星号表示结构已解析。
人体肠道菌群(HGM)对人体健康至关重要,它利用复杂多糖作为其主要碳源。糖胺聚糖是HGM的重要和高度优先的营养来源。各种糖胺聚糖底物的代谢途径尚不清楚。对其遗传位点、代谢多形拟杆菌的糖胺聚糖排列及其生物化学、遗传学和结构解剖学进行了研究。发现了两个以前不为人知的表面聚糖结合蛋白,促进糖胺聚糖进入质周。糖胺聚糖的代谢途径是由不同的动力学和不同的酶的遗传特异性决定的。
图2所示。基于发现的蛋白质组学工作流程。
必须避免反复冻融样品。血清标本在室温下在收集管中沉淀30分钟,然后运至离心管,8000转/分离心5分钟。离心后将上清均匀分成500ul /试样的冷冻管。
采集后必须立即加入抗凝剂和防腐剂,然后在-80°C下冷冻。
尿液样本应均匀分成离心管,每管1ml,每管加入1/100 (w/v)叠氮化钠,-80℃保存。
样品采集后应立即用液氮冷冻,并运至-80℃保存。
细胞活性应立即终止,以保持细胞的完整性。
一般来说,为了保证有足够的样品来完成整个项目,需要尽可能多的提供单个样品的体积。剩余样品将免费保存一年,并在必要时随时退还。所有样品都需要在-80°C下储存和运输,尽量避免使用表面活性剂(SDS、Triton-X)和无机盐。
单组重复临床样本不少于30例。
单组动物标本重复不少于9例。
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参考文献