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蛋白糖基化是蛋白质的常见的翻译后修饰,其输送聚糖蛋白质和特定的氨基酸残基,以形成糖基转移酶的作用下糖苷键。
糖基化修饰主要发生在内质网和高尔基基质中。其主要过程是在糖基转移酶的帮助下将糖链转运到蛋白质上,然后与蛋白质上的氨基酸残基形成糖苷键。糖基化蛋白经过一系列的转运过程和对糖基连接末端进行修剪后,进行聚焦修饰或唾液酸修饰,表明糖基化蛋白组装完成。
图1. Glycomic和聚糖分析glycoproteomic策略(Mereiter,Balmana,Gomes的,麦哲伦,&雷斯,2016)。
在哺乳动物中的主要的糖基化类型的蛋白质可分为两种类型:N-糖基化和O-糖基化,糖蛋白最仅包含一种糖基化类型。然而,一些蛋白质的肽具有两个N-聚糖键和O-聚糖连接。
N-糖基化共价与自由-NH链接2天冬氨酸的蛋白质,并与内质网(ER)的N-连接的聚糖开始的合成的组,然后完成在高尔基体中。
o -聚糖键与蛋白质的丝氨酸或苏氨酸的游离-OH基团共价连接。o -糖基化位点没有保守序列或固定核心结构。o -糖基连接既可以由单糖组成,也可以由巨大的磺化多糖组成,因此o -糖基化的分析比n -糖基化的分析更为复杂。
图2所示。创意蛋白质组学聚糖代谢的服务流程。
N-聚糖分布 | N-Glycan生物合成 | 各种类型的n -聚糖生物合成 | O型聚糖分布 |
粘蛋白型O型聚糖的生物合成 | 甘露糖型O型聚糖的生物合成 | 糖胺聚糖的生物合成 | 硫酸软骨素/硫酸皮肤素 |
硫酸乙酰肝素/肝素 | 硫酸角质素 | 糖胺聚糖降解 | Glycosylphosphatidylinositol (GPI) |
锚生物合成 | 糖脂生物合成 | 乳和Neolacto系列 | 环球和Isoglobo系列 |
Ganglio系列 |
反复冷冻的样品解冻必须避免。血清样品应在收集管中沉淀,在室温下30分钟,然后输送到离心管中,在8000rpm下离心5分钟。离心后,将上清液等分为500微升/样品的冷冻管中。
采集后必须立即加入抗凝剂和防腐剂,然后在-80°C下冷冻。
尿液样本应均匀分成离心管,每管1ml,每管加入1/100 (w/v)叠氮化钠,-80℃保存。
样品采集后应立即用液氮冷冻,并运至-80℃保存。
细胞活性应立即终止,以保持细胞的完整性。
一般来说,为了保证足够的样品来完成整个项目,对单个样本需要的体积要提供尽可能多的。其余的样本将被存放一年免费的,如果需要的话随时返回。所有的样品需要被存储和在-80输送℃。
临床样品中的重复不少于30例一个组。
动物样品中的重复不少于9案件在单个组中。
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参考文献