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糖胺聚糖(GAGs),又称粘多糖,是一种带负电荷的多糖,由重复的双糖单元组成。它们存在于每一个哺乳动物组织中,并包含由其分子结构决定的广泛功能。历史上,GAG的功能被认为局限于细胞水合作用和结构支架。然而,最近的证据表明,GAG也在细胞信号传导中起着关键作用,调节着广泛的生化过程。根据其核心双糖单位,将GAG分为四大类,包括肝素/硫酸肝素、硫酸软骨素、硫酸皮肤素、透明质酸和硫酸角蛋白。其中,keratan sulfate (KS)是唯一一种以半乳糖为结构成分的GAG类型。
图1.糖胺聚糖的主要重复单元。组成单糖的颜色编码符合SNFG术语。缩写如下:Glc代表葡萄糖,Ido代表半乳糖,Gal代表半乳糖,N代表胺,S代表硫酸盐,A代表酸,NAc代表N-乙酰。
基于组织特异性,最重要的是基于化学结构,定义了三类Ks,这根据硫化程度,硫酸化图案和结合Keratan硫酸核与核心蛋白结合的连接的寡糖的类型而变化。形式I KS是一种具有可变硫化(非硫酸盐,单硫酸盐和二硫酸盐)的N链KS链,主要存在于角膜中。II型Ks是几乎完全硫酸化的KS链,其通过Galnac连接到核心蛋白O型,主要存在于软骨组织中。KS型III也高度硫酸化,但通过2-O-甘露糖键连接到其核心蛋白质,是中枢神经系统中最丰富的核心蛋白质。
图2所示。基于发现的蛋白质组学工作流程。
必须避免反复冻融样品。血清标本在室温下在收集管中沉淀30分钟,然后运至离心管,8000转/分离心5分钟。离心后将上清均匀分成500ul /试样的冷冻管。
在收集后必须立即添加抗凝血剂和防腐剂,然后在-80°C下冷冻。
尿液样品应同等分为每管1mL的离心管,每根管加入1/100(w / v)叠氮化钠并储存在-80℃。
应立即在液氮中冷冻样品,然后在收集后运输至-80℃以进行储存。
细胞活性应立即终止,以保持细胞的完整性。
一般来说,为了保证有足够的样品来完成整个项目,需要尽可能多的提供单个样品的体积。剩余样品将免费保存一年,并在必要时随时退还。所有样品都需要在-80°C下储存和运输,尽量避免使用表面活性剂(SDS、Triton-X)和无机盐。
单组重复临床样本不少于30例。
单组动物标本重复不少于9例。
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参考资料