Creative Proteomics提供了一种基于液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)的高通量物质检测和分析技术，可用于多酮类化合物的识别、定量和代谢机制分析。该方法操作步骤简单，可获得灵敏度高、重复性好的分析报告，可帮助研究人员快速获得聚酮类化合物在医疗卫生行业、代谢药物的开发和研究中的应用。
聚酮是聚酮生物合成途径合成的化合物的总称。聚酮在抗感染、抗真菌、抗肿瘤和免疫抑制等方面有很大的应用价值。聚酮主要由聚酮合成酶(PKS)合成，可分为PKS I、PKS II和PKS III。多酮分为两类:芳香族环多酮和非芳香族环多酮，即大环多酮。这两种化合物分别通过II型聚酮合成酶合成途径(PKS II)和I型聚酮合成酶合成途径(PKS I)合成。以4-氨基无氢四环素(ATC)为底物，与纯化的氧硫胺(oxyo thiamine, OxyT)共孵育反应体系，n -甲基化在芳香族聚酮的生物合成中起着重要作用。HPLC/MS结果表明，ATC仅在OxyT存在的情况下产生(图1)。实验表明OxyT是一种具有n -甲基化的催化活性物质，可以催化单甲基化和去甲基化反应，这证明了OxyT在创新性芳香烃多酮生物合成中的潜力。其中，PKS I主要由酮合酶(KS)、烯醇还原酶(ER)、酰基转移酶(AT)、脱氢酶(DH)和酮还原酶(KR)等功能域组成;PKS II主要催化四环和蒽环类化合物的合成;第三党主要是查耳酮合酶,主要存在于植物王国,并负责flavolin的合成和其他组件(图2)。质/ MS方法,中性的损失(NL)多酮类化合物检测的特点是通过他们的分裂模式,然后选择反应监测(SRM)量化其内容。
图1.在ATC生物合成中涉及的N-甲基转移酶Intht。（王2020）。
图2. PKSS的催化反应。（王2020）。
我们的操作技术过程符合较低检测极限的要求（定量最小限制为0.0002-0.01μg/ kg），并降低了复合基质中聚酮化合物的检测和分析。不需要衍生的样本，自动模式用于检测和分析，这可以确保样本的完整性并降低人为错误，因此可以实现高通量检测并获得更准确的分析报告。
图3. Polykete Analysis服务工作流程。
检测方法：LC-MS / MS
监测阶段：A：乙腈，B：水（含0.1％甲酸，2.0mM醋酸铵）
流量：0.4毫升/分钟
运行时间:10分钟
洗脱模式：梯度洗脱
离子源模式:电喷雾离子源，正离子模式(ESI+)
返回打击：75
雾化气体：220
离子源喷涂电压：5000 V.
恢复率：92.25-105.87％
方法再现性：1.53-4.78％
量化最低限度：0.0002-0.01μg/ kg.
分析内容：
1.叶子，根，茎，花，果皮，剥离组织等组织，较大的叶子需要用剪刀迅速切割成碎片，并且用灭菌水快速洗涤分离的样品，吸收纸是在吸收过量的水后立即将液体放入液体中。在氮气中迅速冻结超过2分钟，然后转移到-80°C以储存以避免反复冻结和解冻。
2.细胞标本，取样后离心，取出培养基，立即放入液氮中快速冷冻2分钟以上，然后转移至-80℃保存。
3.每个样品新鲜不少于3克，干样不少于1克。每组至少有三个生物复制，准备一个备份。测量的样品将不退还，请保留备用。
采用LC - MS联合方法可以获得多酮及其代谢物的高质量鉴定和定量分析报告，有助于研究者加深对多酮活性分子类型和分子机制的了解。创新蛋白质组学致力于为您提供更有价值和创新的研究工具和解决方案，聚酮相关领域的分析和应用。
参考文献
联系我们
版权©创意蛋白质组学。版权所有。
电话：
传真:
电子邮件: