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硫酸肝素/肝素分析服务

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创新蛋白质组,作为生物技术行业的领导者,以先进的仪器设备和专业的研究团队,致力于打造高质量的靶向代谢组学服务。我们提供高通量、高精度、短时间的硫酸肝素/肝素分析服务,可以满足客户的所有需求,协助您的科研。

概述

肝素(HP)/硫酸乙酰肝素(HS),聚阳离和杂多糖属于糖胺聚糖系列。HP / HS普遍存在于细胞表面和细胞外基质(ECM)以及细胞内环境(肥大细胞)上。自1916年的发现以来,HP及其低分子准备是最重要的抗凝血剂之一,已被广泛用于临床治疗。The various structural features of HP/HS allow these molecules to interact with various protein (e. g., enzyme inhibitor, chemokine, growth factor, morphogen and other signaling proteins) to participate in various physiological and pathological processes such as coagulation, cell adhesion, inflammation, cell migration, differentiation, and even pathogen infection. These important biological effects have aroused great attention in the structural and functional studies and clinical applications of HP/HS.

肝素/硫酸肝素和硫酸软骨素的生物合成。A.四糖接头区的合成;B.肝素/硫酸乙酰肝素的聚合和改性通道;C.硫酸软骨素的聚合和改性通路。图1.肝素/硫酸乙酰肝素和硫酸软骨素的生物合成。A.四糖接头区的合成;B.肝素/硫酸乙酰肝素的聚合和改性通道;C.硫酸软骨素的聚合和改性通路。

HP / HS多糖的主链由重复的由d葡糖醛酸(中,GlcA)/ L-艾杜糖醛酸羧酸(IDOA)和N-乙酰基d葡糖胺(GlcNAc的)的二糖单元。在HP / HS,其重复二糖,其初始包含中,GlcA-GlcNAc的的单元的共同前体的合成的生物合成,接着进一步修饰由几种酶,包括N-脱乙酰基-N-磺基和3-和6-磺基,其中的GlcNAc修改残基;甲C5-差向异构酶,其将中,GlcA到IDOA残基;和2-O-磺基转移酶来催化中,GlcA / IDOA残基的硫酸化。这些修饰导致在HP / HS二糖的多糖的变化,使得HP / HS自然界中最复杂的聚合物。因此,高结构的复杂性严重阻碍了HP / HS的结构和功能的研究。

好处

  • 短时间
  • 高灵敏度和少数检测限制
  • 高精度和良好的重复性
  • 高吞吐量
  • 定制服务

服务流程

迄今为止,已经基于其底物特异性鉴定了三种类型的肝酶:肝酶I(EC4.2.2.7),其特异性降解高硫酸化和富含IDOA的HP;HE Pase III(EC 4.2.2.8),这往往会降低低硫酸盐和富含GLCA的HS;和hepae II(EC 4.2.2.-),哪种摘要HP和HS。在结构上,肝氢酶I折叠成β-果冻辊结构,并且倾向于切割α-1,4-键连接到IDOA2S / GLCA2S残基。相反,HePase III由N-末端(α/α)5-桶结构域和C末端反平行β-夹层结构域组成,并且喜欢将α-1,4-链接与GLCA / IDOA残基切割。Hepase II采用类似于Hepase III的拓扑,并且在某些情况下具有无选择性的结构,GLCA / IDOA或IDOA2S / GLCA2s。所有肝脏都是共同的,其酪氨酸用作伪造碱和酸的类似催化机制。应当注意,鉴定的所有肝素酶属于内切核酸酶的家族,其随机地切割内部HP / HS链,而仅仅已经发现了外分肝素酶作为用于测序HP / HS链的非常有用的工具。

图A示出了工作流用于与三个步骤进行二糖组成分析。的恢复校准器在硫酸乙酰肝素提取阶段或步骤1中添加;甲二糖校准器在肝素裂合酶消化阶段或步骤2中添加;甲二糖校准与各种浓度的未标记的二糖的混合,并在分析阶段或第3步,通过LC-MS / MS进行分析。图B显示的三个同位素标记格式离子色谱从MRM二糖。图C示出了分析在二糖校准的存在下动态范围。图2.图A示出了工作流用于与三个步骤进行二糖组成分析。的恢复校准器在硫酸乙酰肝素提取阶段或步骤1中添加;甲二糖校准器在肝素裂合酶消化阶段或步骤2中添加;甲二糖校准与各种浓度的未标记的二糖的混合,并在分析阶段或第3步,通过LC-MS / MS进行分析。图B显示的三个同位素标记格式离子色谱从MRM二糖。图C示出了分析在二糖校准的存在下动态范围。

样品要求

  • 血清/血浆:500微升/样品
  • 反复冷冻的样品解冻必须避免。血清样品应在收集管中沉淀,在室温下30分钟,然后输送到离心管中,在8000rpm下离心5分钟。离心后,将上清液等分为500微升/样品的冷冻管中。

  • 蛋白质:100μg
  • 抗凝血(EDTA):1毫升
  • 采集后必须立即加入抗凝剂和防腐剂,然后在-80°C下冷冻。

  • 尿液:1毫升/样品
  • 尿液样本应均匀分成离心管,每管1ml,每管加入1/100 (w/v)叠氮化钠,-80℃保存。

  • 动物组织:200毫克/样品
  • 应立即在液氮中冷冻样品,然后在收集后运输至-80℃以进行储存。

  • 细胞:≥1×107./样本
  • Cytoactive应该立即终止以维持细胞完整性。

  • 粪便:500毫克/样品

一般来说,为了保证足够的样品来完成整个项目,对单个样本需要的体积要提供尽可能多的。其余的样本将被存放一年免费的,如果需要的话随时返回。所有的样品需要被存储和在-80℃下运输和尽量避免使用表面活性剂(SDS,的Triton-X)和无机盐。

在单个组中不少于30例重复临床样品。

动物样品在单个组中不少于9例。

报告交货

  • 实验程序(中英文)
  • 装置的相关参数(中英文)
  • 用于鉴定物质的定量或定量信息
  • 质谱数据
  • 原始数据文件和详细的总结报告

服务周期

  • 样品测试:5-10个工作日
  • 数据分析:5-10个工作日

创意蛋白质组学代谢分析平台致力于各种目标物质的全息,可靠和准确的分析服务,适用于生命科学研究,药物勘探,生物学测定等领域。我们真诚希望与您合作,助致您的科学研究。

参考文献

  1. M. Suflita,L. Fu,W. He,等。肝素和相关多糖:使用重组酶和代谢工程合成。苹果microbiol biotechnol,2015,99(18):7465-79。
  2. K.Sugahara,H. Kitagawa。肝素和硫酸乙酰肝素生物合成。Iubmb Life,2002,54(4):163-75。
  3. W.王,石乳,Y.秦等。研究和硫酸软骨素/硫酸皮肤素降解酶的应用。前细胞发育生物学,2020年,8:560442。
  4. Z. Wang,K. Arnold,Y.Xu,等。同位素标记的校准剂的硫酸乙酰肝素的定量分析。Commence Biol,2020,3(1):425。

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