硫酸肝素/肝素分析服务

HP / HS多糖的主链由重复的由d葡糖醛酸（中，GlcA）/ L-艾杜糖醛酸羧酸（IDOA）和N-乙酰基d葡糖胺（GlcNAc的）的二糖单元。在HP / HS，其重复二糖，其初始包含中，GlcA-GlcNAc的的单元的共同前体的合成的生物合成，接着进一步修饰由几种酶，包括N-脱乙酰基-N-磺基和3-和6-磺基，其中的GlcNAc修改残基;甲C5-差向异构酶，其将中，GlcA到IDOA残基;和2-O-磺基转移酶来催化中，GlcA / IDOA残基的硫酸化。这些修饰导致在HP / HS二糖的多糖的变化，使得HP / HS自然界中最复杂的聚合物。因此，高结构的复杂性严重阻碍了HP / HS的结构和功能的研究。

好处

• 短时间
• 高灵敏度和少数检测限制
• 高精度和良好的重复性
• 高吞吐量
• 定制服务

服务流程

迄今为止，已经基于其底物特异性鉴定了三种类型的肝酶：肝酶I（EC4.2.2.7），其特异性降解高硫酸化和富含IDOA的HP;HE Pase III（EC 4.2.2.8），这往往会降低低硫酸盐和富含GLCA的HS;和hepae II（EC 4.2.2.-），哪种摘要HP和HS。在结构上，肝氢酶I折叠成β-果冻辊结构，并且倾向于切割α-1,4-键连接到IDOA2S / GLCA2S残基。相反，HePase III由N-末端（α/α）5-桶结构域和C末端反平行β-夹层结构域组成，并且喜欢将α-1,4-链接与GLCA / IDOA残基切割。Hepase II采用类似于Hepase III的拓扑，并且在某些情况下具有无选择性的结构，GLCA / IDOA或IDOA2S / GLCA2s。所有肝脏都是共同的，其酪氨酸用作伪造碱和酸的类似催化机制。应当注意，鉴定的所有肝素酶属于内切核酸酶的家族，其随机地切割内部HP / HS链，而仅仅已经发现了外分肝素酶作为用于测序HP / HS链的非常有用的工具。

图2.图A示出了工作流用于与三个步骤进行二糖组成分析。的恢复校准器在硫酸乙酰肝素提取阶段或步骤1中添加;甲二糖校准器在肝素裂合酶消化阶段或步骤2中添加;甲二糖校准与各种浓度的未标记的二糖的混合，并在分析阶段或第3步，通过LC-MS / MS进行分析。图B显示的三个同位素标记格式离子色谱从MRM二糖。图C示出了分析在二糖校准的存在下动态范围。

样品要求

• 血清/血浆：500微升/样品

反复冷冻的样品解冻必须避免。血清样品应在收集管中沉淀，在室温下30分钟，然后输送到离心管中，在8000rpm下离心5分钟。离心后，将上清液等分为500微升/样品的冷冻管中。

• 蛋白质：100μg
• 抗凝血（EDTA）：1毫升

采集后必须立即加入抗凝剂和防腐剂，然后在-80°C下冷冻。

• 尿液：1毫升/样品

尿液样本应均匀分成离心管，每管1ml，每管加入1/100 (w/v)叠氮化钠，-80℃保存。

• 动物组织：200毫克/样品

应立即在液氮中冷冻样品，然后在收集后运输至-80℃以进行储存。

• 细胞：≥1×10^7./样本

Cytoactive应该立即终止以维持细胞完整性。

• 粪便：500毫克/样品

一般来说，为了保证足够的样品来完成整个项目，对单个样本需要的体积要提供尽可能多的。其余的样本将被存放一年免费的，如果需要的话随时返回。所有的样品需要被存储和在-80℃下运输和尽量避免使用表面活性剂（SDS，的Triton-X）和无机盐。

在单个组中不少于30例重复临床样品。

动物样品在单个组中不少于9例。

报告交货

• 实验程序（中英文）
• 装置的相关参数（中英文）
• 用于鉴定物质的定量或定量信息
• 质谱数据
• 原始数据文件和详细的总结报告

服务周期

• 样品测试：5-10个工作日
• 数据分析：5-10个工作日

创意蛋白质组学代谢分析平台致力于各种目标物质的全息，可靠和准确的分析服务，适用于生命科学研究，药物勘探，生物学测定等领域。我们真诚希望与您合作，助致您的科学研究。

参考文献

1. M. Suflita，L. Fu，W. He，等。肝素和相关多糖：使用重组酶和代谢工程合成。苹果microbiol biotechnol，2015,99（18）：7465-79。
2. K.Sugahara，H. Kitagawa。肝素和硫酸乙酰肝素生物合成。Iubmb Life，2002,54（4）：163-75。
3. W.王，石乳，Y.秦等。研究和硫酸软骨素/硫酸皮肤素降解酶的应用。前细胞发育生物学，2020年，8：560442。
4. Z. Wang，K. Arnold，Y.Xu，等。同位素标记的校准剂的硫酸乙酰肝素的定量分析。Commence Biol，2020,3（1）：425。