iTRAQ是Isobaric tag(相对和绝对定量)的首字母缩写，由美国应用生物系统公司于2004年开发。它是一种等压标记方法，可以在一次单一的实验中用质谱法测定来自不同来源的蛋白质的数量。
iTRAQ的原理和工作流程
首先，我们应该知道iTRAQ试剂的结构。等压标记试剂由一个独特的带电报告基团、一个肽反应基团和一个中性平衡基团组成。肽反应基团共价连接iTRAQ试剂等压标签与每个赖氨酸侧链和肽的n端基团，标记给定样品消化中的所有肽。中性平衡组确保iTRAQ标记的肽显示相同的质量，4位和8位的总质量保持145 Da和305 Da。
图1所示。iTRAQ试剂的结构
水解蛋白质样品可得到多肽混合物。样品中的所有肽用不同的iTRAQ试剂标记，所有标记蛋白样品混合。对多肽进行串联质谱分析以获得质谱。在第一阶段的质谱分析中，无论使用哪种iTRAQ试剂，对相同的肽进行不同的同位素标记后，不同来源的相同肽的分子量完全相同，呈现出相同的峰。收集同一峰的样本进行第二阶段质谱分析，在第二阶段质谱分析中，平衡基团和肽反应基团之间的键被破坏，平衡基团失去。不同同位素标记的同一肽产生不同质量的报告离子，报告离子表现出不同的峰。通过软件和数据库对相关数据进行分析，可以获得不同样品间相同肽段的定量信息。
在用于实验的iTRAQ一般的工作流程中，每个样本被减小，半胱氨酸阻断，并用胰蛋白酶消化。每个样品被标记在单管中一个不同的iTRAQ标记。然后我们可以所有的iTRAQ试剂标记的样本组合成一个样本混合物用于液相色谱 - 串联质谱法（LC-MS / MS）分析。
iTRAQ的优点和缺点
基于质谱的定量蛋白质组学是iTRAQ最重要的优势之一，特别是在临床蛋白质组学领域。利用基于itraq的研究，可以很容易地量化特定药物的代谢进程或特定疾病不同阶段某些生物标志物的进行性浓度。多路复用能力是iTRAQ的另一大优点。有八个报告离子可用，因此实现在八个样品水平的多路复用。此外，iTRAQ可以减少总的时间和变化。另一方面，iTRAQ试剂非常昂贵，而且对盐类污染也非常敏感。此外，分析iTRAQ数据需要复杂的软件。另一个缺点是由于酶解效率低而产生的可变性。
的iTRAQ的例子
图2。该方法用于识别和量化胰岛素刺激后酪氨酸磷酸化位点。(Schmelzle K。等；2006)
还有的是，iTRAQ的是用来识别和量化后胰岛素刺激的酪氨酸磷酸化位点的实例。在这个实验中，脂肪细胞与胰岛素不同时间刺激。细胞裂解和消化后，研究人员使用的iTRAQ标记产生的肽。标记的肽合并以供进一步分析（磷酸肽免疫沉淀，固定化金属亲和层析，和LC-MS / MS）。LC-MS / MS后，肽的身份被确定，并且使用了标签群众114,115，116的117质量 - 电荷比（M / Z）的区域，并计算出磷酸化的肽的比率在在不同的时间点，用5分钟胰岛素刺激进行比较。
的iTRAQ已广泛用于蛋白质的定量分析和生物材料，如微生物，动物，植物和生物医学样品。在创意蛋白质组学，我们有信心为客户提供专业，可靠的iTRAQ服务和其他定量蛋白质组学服务，包括但不限于：
参考:
- 王志强，王志强，王志强，等。胰岛素信号转导中酪氨酸磷酸化的时间动态。糖尿病，2006,55(8):2171-2179。