创新蛋白质组学提供iTRAQ蛋白定量服务适合于无偏见的非目标生物标志物发现。蛋白质的相对定量在复杂混合物中发现生物标记物质谱法可以使用iTRAQ技术轻松快速地实现。iTRAQ非常适合于比较正常、疾病和药物处理样本,时间进程研究,生物复制和提供相对定量。
iTRAQ技术利用等压试剂标记多肽和蛋白质的伯胺。iTRAQ试剂通常由N-甲基哌嗪报告基、平衡基和与肽的伯胺反应的N-羟基琥珀酰亚胺酯基组成。每个iTRAQ试剂中存在的平衡基团起到使每个样品中的标记肽等压的作用,并且通过分析质谱仪中裂解后产生的报告基团来促进定量。目前主要使用两种试剂:4-复合物和8-复合物,可用于标记不同样品/处理的所有肽。然后将这些样品汇集起来,通常通过纳米液相色谱法进行分馏,并通过串联质谱(MS/MS)进行分析。
iTRAQ工作流:
iTRAQ工作流(4-plex)如上所示。在不同的处理条件下制备待定量的样品,然后裂解细胞提取蛋白质。在使用标准蛋白质测定法来估计每个样品的蛋白质浓度之后,蛋白质用一种酶(如胰蛋白酶)消化以产生蛋白水解肽。每个肽消化用不同的iTRAQ试剂标记,然后标记的消化结合成一个样品混合物。结合肽混合物的分析质/女士用于鉴别和定量。
然后使用片段数据进行数据库搜索,以识别标记的多肽和相应的蛋白质。所附标签的碎片生成低分子质量的报告离子,可以用来相对地量化肽和它们起源的蛋白质。
iTRAQ技术的优势:
生物信息学分析:
排序过程: