标记转移蛋白相互作用分析


标记转移法结合了交联方法,通过标记与感兴趣蛋白质相互作用的蛋白质来研究蛋白质-蛋白质相互作用。该方法可用于发现新的相互作用,确认其他技术提出的假定相互作用,以及研究蛋白质复合物。此外,标记转移方法可以检测到弱的或短暂的蛋白质相互作用,而这些相互作用通常不能被检测到共免疫沉淀,或下拉法.

在典型的标记转移工作流程中,首先诱饵蛋白与标记转移试剂(LTR)的活性部分反应,标记转移试剂具有放射性、荧光或生物素标记;然后让标记的诱饵蛋白与猎物蛋白相互作用在体外形成稳定或短暂的复合物,然后暴露于紫外光下激活交联剂上的光反应基团部分,然后共价结合到猎物蛋白质上;通过切割交联剂间隔臂以释放附着的诱饵蛋白来完成标记转移。蛋白质相互作用可以用多种方法进行分析,包括Westernblot、蛋白质测序和质谱分析。

在以前的研究中,荧光或放射性标记的芳基叠氮化合物、卡宾或二苯甲酮与激素、肽或核酸相连,用于标记和探索以前未知的猎物蛋白质。在这方面,利用标记转移方法已被广泛应用于研究核酸-蛋白质相互作用。尽管大多数ltr对于直接标记特定的蛋白质结构域是有价值的,但它们通常不适用于蛋白质结构域的定位蛋白质相互作用网络,因为附着在交联剂上的归巢分子通常只引导交联到结合域。

有了最新版本的标签转移策略,创造性的蛋白质组学可以帮助您为实验目标选择合适的交联剂,并为您探索感兴趣的蛋白质-蛋白质相互作用进行后续分析。


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