糖类是表征糖基化和蛋白质糖基化的定量,以区分这种细微差异,包括聚糖生物标志物鉴定诊断,预后和药代动力学。定义绝对量化以确定单个聚糖的精确样品浓度,而相对定量仅提供正常化的总甘油含量的百分比。绝对量化通常很困难,因为通过与来自质谱(MS)或色谱法的数据进行比较,通常可以单独分析样品,或者通常错过微妙的定性和/或定量差异。随着单个聚糖的含量对于聚糖功能显着重要,绝对的聚糖量化是生物学相关的,并且能够提供糖基化的疾病相关变化的概述。MS与稳定同位素标记用于定量分析已被定义为代谢组和蛋白质组学中的常规方法。它已被用于含量的定量分析。
稳定的同位素介导的聚糖定量可以通过将同位素富集标准物掺入样品中或通过将整个甘油混合物用重标记标记标记来进行。
1.稳定同位素标签
由于缺乏重同位素标记的聚糖标准,基于重同位素的聚糖定量策略主要集中在将稳定同位素标记的标签并入聚糖样品中进行差异定量聚糖分析。一种有效的方法是使用不同同位素标记的碘甲烷试剂对聚糖进行过甲基化。此方法扩展使用单一,双重和三重氘化碘甲烷剂,从而允许四重。这一程序能够分析从各种糖蛋白混合物中释放的N-连接聚糖。
图1.使用稳定同位素甲基碘试剂通过渗透甲基化的多路复用比较糖映射的表示
2.以稳定同位素聚糖为内标进行绝对聚糖定量
在天然化合物上的同位素标记的标准的显着质量增量导致分析物的同位素谱的清晰分离,以及用于聚糖量化的枢转的标准。稳定同位素标记的聚糖作为内标的布置允许在复杂混合物中绝对定量甚至低丰富的聚糖标记物。对于临床生物标志物的聚糖绝对定量的发展是重要的。
图2.存在稳定同位素标记的内部N-聚糖标准物(用星号标记)时IgG1聚糖谱的定量MALDI-TOF MS光谱1.
还有其他方法用于绝对聚糖定量,例如用于聚糖定量的RapiFluor-MS标记聚糖标准品和使用荧光检测的HPLC的2-氨基苯甲酰胺标记聚糖。
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参考
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