糖链的一级结构包括单糖残基的性质和顺序,糖苷键的构型和位置,以及它们所连接的非糖链实体的性质和位置。此外,不同的聚糖可以附着在糖蛋白的不同位点上。此外,通常是三维特征或特定的聚糖表面分布被聚糖结合蛋白识别。多糖的结构表征包括单糖的残基组成、序列和连接类型。表征这些不同的结构特征需要一系列不同的方法。
图1所示。多糖的复杂和异质结构
单糖组成分析
有一种简便、信息丰富的方法可以定性分析多糖中的单糖组成。糖水解成单糖后,可以用比色反应来测定样品中己糖、己糖醛酸或己糖胺的总量。这种方法不需要预先从糖缀合物中释放聚糖。
定量单糖分析提供了估计的各多糖组分的单糖摩尔比。分析包括几个步骤:所有糖苷键的裂解(通常通过酸水解),裂解单糖的分馏,GC-MS或HPLC检测,以及定量。
连锁分析
参见n -糖链分析和o -糖链分析
多糖序列分析
高特异性的外糖苷酶通常用于确定聚糖的序列和结构。这种酶分析是一种强有力的技术,可以连续应用,也可以在矩阵阵列中应用。外糖苷酶从聚糖的非还原端去除末端糖基,但不切断单糖之间的内部键。利用不同的连锁特异性外糖苷酶,可以识别所去除的聚糖残基的连锁和糖基。
图2用于结构分析的糖苷酶
外糖苷酶消化结合电泳或色谱等高效分离技术是一种高效、快速的寡糖结构表征方法。
三维聚糖结构
由于糖苷键固有的灵活性,聚糖在溶液中不具有明确的三维结构。晶体结构可用于许多单糖和低聚糖。一些分子模拟软件可以用来从简单的糖结构生成高度复杂聚糖的近似模型。多糖在溶液中的构象和动力学的全面表征仍然是一个活跃的研究领域,并且相对地基于核磁共振谱的结果。最初的三维聚糖结构可以通过使用一些方便的工具如碳水化合物构建器来建立,然后可以通过结合溶液核磁共振数据(如NOEs、残余偶极耦合的角度和远距离约束以及顺磁效应测量)来进一步精化。
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