糖基化是最具挑战性的翻译后修饰之一。它通常有一组修改，而不是单个修改。即使是肽上的一个糖基化位点，也具有不同链长和分支的多聚糖异构体。o -聚糖主要通过末端单糖残基和丝氨酸或苏氨酸的羟基之间的糖苷键连接多肽。与n -聚糖不同，o -连接的氨基酸一致序列尚不清楚。o -聚糖在结构上具有多样性，可以分为几个核心结构相对异质的结构族。

图1所示。n -链聚糖的核心结构不同

与n -聚糖不同，到目前为止还没有一种通用酶可以消化大多数o -链聚糖。o -葡聚糖酶只去除未取代的二糖O-GalNAc引发的葡聚糖。化学释放法是o -聚糖分离的主要方法。大部分o -糖肽由o -糖肽释放，即β-消除。

图2。聚糖谱分析样品制备的一般程序

o -聚糖谱分析通常采用MALDI-TOF ms进行，需要将o -聚糖进行过甲基化衍生，将所有羟基转化为甲基醚，并通过羧基的甲基化来稳定唾液酸。这使得MALDI TOF MS可以在阳性模式下分析所有o -聚糖。将过甲基化的o -聚糖直接注入质谱仪可以提供聚糖组成的信息。

图3。利用质谱检测和分析o -聚糖结构的例子¹

60%以上的治疗性蛋白质在生物合成后通过添加n -聚糖或o -聚糖进行翻译后修饰。为了维持持续的生物治疗药物糖基化模式，有必要在有效的生产过程中对糖基化进行表征。在Creative Proteomics，我们提供o-glycan profiling服务，以支持治疗性蛋白质的开发和商业化。我们的o -聚糖谱分析工作流程如下。

图4。o -聚糖分析服务的工作流程。

• 释放。o -链聚糖通常通过还原碱性β消除释放。
• 隔离。亲水作用色谱(HILIC)可富集释放的o -聚糖。每个聚糖形式的连接可以通过特定的外糖苷酶的消化来确认。
• 标签。为了改进高效液相色谱(HPLC)和质谱(ms)对多糖的分析，将释放的多糖与2-氨基苯甲酸(2-AA)或2-氨基苯甲酰胺(2-AB)进行荧光标记。
• 浓缩。标记的o-聚糖通过IHLIC富集。
• 检测。然后用MALDI-TOF MS(基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱)或ESI-MS(电喷雾电离质谱)检测富集的邻聚糖。

样品的要求

我们使用一系列的样本来源如下。

• 蛋白质:100 ug
• 细胞:1×10⁷
• 动物组织:1 g
• 植物组织:200毫克
• 抗凝血(EDTA): 1ml
• 血清:0.2 - -0.5毫升
• 尿液:2毫升
• 微生物样品:200mg(干重)

o -聚糖分析服务的优点

• 高灵敏度，可重复o -聚糖模式
• 相对较快的周转时间
• o -聚糖的高覆盖率
• 研究复杂的生物基质，如细胞和组织
• 详细报告包括实验程序、液相色谱和质谱仪参数、MS原始数据文件、o -聚糖谱分析结果和生物信息学分析。

作为在蛋白质组学领域具有数十年经验的领先公司之一，Creative proteomics提供作者分析服务根据您的需要定制。请联系我们讨论您的项目。

参考:

1.杨思远，胡勇，L. Sokoll，张慧(2017)。用固相法同时定量N-和o -聚糖，自然的协议, 1229 - 1244。

作为组学领域的领先公司之一，Creative Proteomics拥有多年的组学研究经验，为您提供个性化的糖组分析服务。联系我们来讨论你的项目。

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