Co-immunoprecipitation (Co-IP)


介绍

共同免疫沉淀(Co-IP),简称Co-IP,是一种广泛应用的技术,通过利用靶蛋白特异性抗体间接捕获与该特定靶蛋白结合的蛋白质,来识别生理相关的蛋白质-蛋白质相互作用。作为IP的延伸,Co-IP不仅可以捕获和纯化主要靶点,还可以通过天然相互作用捕获和纯化与靶点结合的其他大分子。IP和co-IP的区别是实验的重点。IP聚焦于主要靶点,与抗体结合。然而,Co-IP针对的是次级靶点,它与一级蛋白相互作用,而不是抗体。免疫沉淀后,蛋白捕获在珠上被洗涤和洗脱获得纯化的一级和二级靶蛋白。这些目标蛋白可以通过多种方法进行表征,如western nblot和shotgun策略下的质谱分析,以确定伙伴蛋白id、结合亲和度、结合动力学和一级蛋白未被发现的功能。

Co-immunoprecipitation (co-IP)

Co-IP的关键因素:

作为一种强有力的技术,Co-IP经常被生物化学家用来探索蛋白质之间的相互作用。虽然Co-IP方法很简单,但通过Co-IP反应来确定蛋白质间的生理相互作用并不容易,因为相互作用不稳定,与IP试剂的非特异性结合和抗体污染。以上问题都会对蛋白质相互作用的检测产生负面影响。

蛋白质复合物的Co-IP

由于Co-IP依赖于蛋白-蛋白相互作用来检测结合蛋白,所以整个Co-IP过程中生理相互作用的结合亲合力和稳定性非常重要。不充分的结合时间和广泛的洗涤步骤可能会降低结合效率,导致蛋白质相互作用检测失败。因此,对于被预测具有周结合亲和或动态相互作用的蛋白质,必须提前稳定蛋白质-蛋白质相互作用,例如,可以在Co-IP之前进行交联过程。

不具体的交互

细胞膜和细胞器的破裂导致大量被边界分开的蛋白质释放出来与之接触。因此,不可避免地会出现非特异性交互,即假阳性交互,干扰数据分析。这对于那些有展开或柔性区域的蛋白质来说尤其常见,这些区域相对来说是粘性的,并且不明确地与其他蛋白质结合。解决这类问题的方法可以是使用一抗来去除非特异性蛋白的裂解液的预处理,并改变缓冲液的离子强度以减少非特异性结合。

创造性的蛋白质组学可根据客户需求定制实验设计,细化Co-IP参数。我们承诺与我们经验丰富的科学家和技术人员进行可靠的蛋白质-蛋白质相互作用的Co-IP分析。

联合ip服务的特点:

我们的Co-IP服务包括:

排序过程

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