随着微阵列技术的发展,Glycan微阵列对蛋白质 - 聚糖结合事件的高通量研究以及筛选聚糖结合蛋白(Gbps)的高通量研究。聚糖微阵列是在单个载玻片上印刷的多种聚糖或糖缀合物的介绍,用于用Gbps筛选,包括凝集素,抗体,细菌和病毒。聚糖通常用官能团衍生化并固定在每个聚糖的类似浓度上的活化玻璃载玻片上。甘草微阵列的效用与印刷表面上可用的聚糖的数量和各种直接相关,以通过Gbps询问。
用于开发聚糖阵列的基本原理是用Gbps或潜在的Gbps询问它,并量化表明糖粉结构的特定荧光信号,所述GBP有问题的结合。通过比较GBP对相关聚糖结构的相对结合,可以定义GLYCAN基序或基序,与其他相关结构相比,GBP识别GBP具有更高的结合。
图1.制备共价甘草微阵列的一般策略
有一种构建聚糖微阵列的一般策略。从天然来源获得的游离聚糖或化学合成以在还原末端含有反应性胺空间基团,用于共价印刷。固定化的聚糖沉积在空间离散的图案中的载玻片上并储存在干燥的条件下。然后可以将载玻片水合并与可结合聚糖的化合物或细胞询问或孵育,包括纯化的天然或重组Gbps,抗体,毒素,血清,细胞,病毒和细菌。通过直接或间接荧光方法检测结合,其提供可以识别的荧光斑点的图像以与沉积的聚糖重合。测量荧光的数据强度并在微阵列上测量和绘制甘草数。
图2。聚糖微阵列的各种应用原理图
聚糖微阵列技术已成为分析复杂生物样品中糖基化变化的一种灵敏和通用的方法。它不仅可以研究糖聚糖- gbps的结合,还可以提供糖聚糖-蛋白质相互作用的动力学分析。如今,这一应用已迅速扩展,现已成功地识别了多糖与蛋白质、病毒、细菌和真核细胞之间的选择性相互作用,最近甚至还能识别活细胞对固定化多糖的反应。聚糖微阵列可用于发现功能性聚糖,表征聚糖加工酶,检测病原体以进行诊断。它也适用于监测多个分子与生物分子的相互作用,其中聚糖涉及,提供了大量的生物测定选择。
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