糖基化主要是指将聚糖连接到蛋白质、脂质或其他有机分子上的酶促过程。它是最常见的蛋白质翻译后修饰(PTM)。糖基化分析是具有挑战性的，因为复杂和等压性质的附加聚糖。随着单克隆抗体、糖蛋白、激素、细胞因子和凝血因子等蛋白治疗手段在临床中的应用越来越广泛，对蛋白质n -糖基化的常规监测越来越受欢迎。

图1所示。不同生物产生的n -聚糖种类不同

n -糖是具有Man3-GlcNAc2核心的多相触角型寡糖结构。它们通过末端n -乙酰氨基葡萄糖(GlcNAc)和NH之间的糖苷键连接到多肽链上₂天冬酰胺。这组互补分析的目的是阐明感兴趣分子(如蛋白质或肽)的整体n -聚糖谱。大部分n -聚糖样品的制备包括糖蛋白的消化、去糖基化、纯化、标记/衍生和固相萃取。还可以根据样品的性质使用其他步骤和技术选择。

图2。n -聚糖分析的一般工作流程

基于MALDI TOF MS和/或UHPLC的技术确定与纯化目标分子或分子混合物相连的n -聚糖总体群体。

1.MALDI-TOF质谱分析n -聚糖谱

定性基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)对糖基化化合物的结构表征具有高灵敏度和鲁棒性，也可以用于高通量的方式。单电荷离子形成保持MALDI能力，而不是电喷雾电离对n -聚糖混合物。用肽n -糖苷酶A或F进行酶解脱糖释放的n -糖经过过甲基化后进行分析。

图3。利用质谱检测和分析n -聚糖结构的例子

2.用HILIC-UHPLC质谱分析n -聚糖

亲水性相互作用色谱(HILIC)是n -聚糖分析的一种重要技术。因此，由于其被广泛接受，HILIC-UHPLC对PNGase F的酶解聚糖释放，然后2-氨基苯甲酰胺(2-AB)衍生化的糖谱分析是一种快速和可靠的技术，可以分析大量的已知的n -聚糖谱。在荧光标记前，当有大量的洗涤剂、非挥发性盐或含有游离氨基的物质干扰衍生化反应时，需要在TSK Amide-80柱上进一步纯化收获的n -聚糖。标记的n -聚糖通过HILIC分离结合质谱检测进行分析。

图4。用HILIC柱分析n -聚糖的工作流程

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