凝集素微阵列分析


凝集素微阵列是2005年发展起来的一种新的基于凝集素的聚糖谱分析方法,它是一种利用固定在固体表面的一组凝集素对聚糖和糖蛋白进行高通量分析的新平台。凝集素微阵列可以通过分析多糖和多种凝集素之间的生物化学相互作用来评估糖蛋白和细胞糖基化的整体特征。它是一种最灵敏、快速和高通量的分析方法,可以同时分析多种凝集素-聚糖相互作用。凝集素微阵列最吸引人的优点是它具有极其有用的特性,可以直接应用于糖蛋白的纯和粗形式(通常是临床样本,如血清和组织提取物)的聚糖。凝集素微阵列是一种独特的分析糖蛋白糖基化特性的方法。

凝集素微阵列分析图1所示。凝集素芯片检测原理图

凝集素微阵列的一般策略包括将凝集素固定在固体表面、聚糖或糖蛋白样品标记、样品与凝集素结合以及检测。固定凝集素的方法多种多样,包括卡宾插入法、生物素-亲和素桥法、通过环氧官能化或N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)衍生的酯将凝集素的蛋白质主链赖氨酸侧链的胺官能团附着到固体表面以及三维水凝胶表面。根据凝集素微阵列分析的目的,凝集素来源可以从细菌、真菌、植物到合成的重组突变体库。用于结合的糖缀合物可以来自生物样品的各种分析物,包括糖蛋白、总细胞裂解物、完整细菌,甚至整个哺乳动物细胞。聚糖或糖蛋白通常用荧光探针标记。在基于凝集素阵列的检测中,主要的检测方法是荧光检测。基于双色标记的比值法也被用于凝集素微阵列检测,用于细胞糖原的差异分析。基于倏逝场激活荧光检测的凝集素微阵列能够在没有任何洗涤过程的情况下特异检测荧光标记的聚糖或糖蛋白,并且能够在平衡状态下进行液相观察。

凝集素微阵列分析图2.凝集素微阵列技术概述

凝集素基因芯片技术作为一种高灵敏度、高通量的多糖分析技术,在糖组学和糖蛋白质组学研究中具有广阔的应用前景。它可以提供快速分析糖蛋白的糖基化谱和糖形表征。这也是一个有用的方法定量分析凝集素-糖蛋白相互作用。通过比较微阵列分析,可以检测到结构差异,即凝集素结合强度的信号模式的变化。因此,凝集素芯片是一种有效的方法来控制各种糖蛋白产品(如抗体药物)的质量,并对适当的临床样本进行差异分析,以发现有用的聚糖相关生物标志物。凝集素芯片也有可能用于细菌细胞表面聚糖和哺乳动物细胞表面糖的分析。

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