本质上发现的蛋白质的大小从5 kda到大于400 kda。蛋白质消化呈现将蛋白质切成较短碎片的方法，称为肽。它允许根据其性质鉴定和表征蛋白质。蛋白质消化是在质谱前（MS）分析的关键步骤（MS）肽，用于成功蛋白质鉴定和表征，生物标志物发现和系统生物学。尽管MS可以研究完整蛋白质，但较小的肽促进蛋白质鉴定并改善由于溶解性和异质性而可能降低的蛋白质的覆盖率。因此，最常见的蛋白质组学方法利用特异性消化来产生较小的片段。通过高效液相色谱（HPLC）和HLPC偶联MS更容易分离和表征肽。

图1. MS分析的一般工作流程。

蛋白质消化服务概述

Creative Proteomics的蛋白质消化方法有两种，(1)凝胶消化法(聚丙烯酰胺凝胶基质中的蛋白质消化);(2)溶液内消解(蛋白质在氯仿/甲醇中沉淀，然后在尿素中溶解和消解)。这些策略旨在溶解疏水性蛋白质，用胰蛋白酶或其他蛋白酶消化蛋白质，并去除SDS。凝胶消解法已成为常规的蛋白质分离的1-D或2-D电泳。尽管凝胶内的消化是可靠的、有效的和可重复的，但却是费时费力的。溶液消化法需要更少的时间，但它引入了样品损失，由于低再溶解的聚集蛋白。

蛋白质消化工作流程

在Creative Proteomics，我们为蛋白质分析提供凝胶和溶液中的蛋白质消化服务。蛋白质消化的工作流程包括以下几个步骤:

1.溶菌产物准备。裂解、分馏、耗竭、富集和透析。

2.在溶液或凝胶中消化。

一种。使用尿素和胍如胶质剂等蛋白质变性;

b.用DTT还原二硫桥;

c.碘乙酸或碘乙酰胺使半胱氨酸烷基化;

天。删除摄取者和交换缓冲区;

e。在合适的pH和温度下，用喹硫孕蛋白酶或其他蛋白酶在合适的pH和温度下过夜的过夜，以约18小时;

F。通过添加（甲醛）酸停止消化。

3.蛋白质富集/清理。

我们还提供96孔格式的高通量、自动化蛋白质消化服务。

图2。蛋白质消化的工作流程。

样品的要求

我们接受一系列样本，例如：

• 天然来源的天然蛋白质
• 来自重组来源的融合和标记的蛋白质
• 不同同型抗体
• 膜蛋白

请至少提交100倍蛋白质。对于溶液中的蛋白质，浓度应大于1mg / ml。

蛋白质消化的优点

• 灵活性．我们提供凝胶素和溶液内蛋白质消化策略。
• 准确性和提高覆盖范围．我们的消化服务可以大大提高MS分析的准确性和覆盖范围。
• 多个应用程序．促进蛋白质鉴定和鉴定，发现疾病生物标记物，并有助于理解生物过程。
• 完整的蛋白质组学服务．我们提供完整的蛋白质组学服务，涵盖蛋白质组学分析的整个过程。

创意蛋白质组学提供凝胶和溶液蛋白质消化服务，可用于成功蛋白质和蛋白质组分析。随着每个项目都有不同的要求，请联系我们的专家讨论您的特定需求。

参考
1. Switzar L，Giera M，Niessen W M A.蛋白质消化：可用技术的概述和最近的发展。蛋白质组研究杂志， 2013, 12(3): 1067-1077。