多糖分析的方法和方法


多糖分析的方法和方法通过通过糖苷键聚合大于10个单糖分子来制备多糖。多糖的分子量相对较大,通常由数百甚至成千上万的单糖分子组成。多糖与核酸,蛋白质和脂质一起被称为在许多生命活动中起重要作用的生命中的四种基本物质。继续发现多糖的生物活性。一些已知的活动包括免疫调节,抗肿瘤,降低血糖,降低血脂,抗病毒,消除氧化自由基和延迟老化。在高等植物,动物,藻类和细菌中发现多糖,并且广泛分布。大多数多糖源自组织细胞,这些细胞对细胞和对细胞和体具有副作用,使其成为理想的药物来源。近年来,随着生物学和化学等相关学科的快速发展,多糖化合物也越来越多地研究。国际科学界认为对多糖作为生命科学前沿的研究,甚至提出21世纪是多糖的世纪。

多糖分析的过程

多糖分析的方法和方法

多糖通过氢或离子键与细胞壁或间质物质连接。通常根据多糖和不同的提取位点的存在通常使用不同的提取方法。热水,酸,碱,乙醇等通常用作溶剂,通过微波或超声辅助粗萃取。近年来常用的方法包括超临界流体提取技术和复杂的酶辅助提取技术。使用这些方法,复杂的酶可以特异性降解细胞壁和用于溶解细胞内大分子在升高的条件下溶解的屏障,以加速多糖的释放。同时,可以通过根据酶的特征改变系统条件来控制反应。

粗多糖提取物通常含有杂质,例如无机盐,脂质,蛋白质和低分子非极性物质。对于低分子量杂质,可用于去除透析。通常通过蛋白酶方法,SEVAG方法,TCA方法和三氟氯乙烷法除去蛋白质。可以用有机溶剂如乙醇,乙醚和石油醚除去脂肪。吸附和氧化是除去颜料杂质的常用方法。

分离和除去杂质后,可以获得混合的多糖溶液,并将混合多糖溶液分成各种单糖的方法是多糖的纯化。更常用的方法包括沉降,色谱,区电泳,超速离心等生物化学分析方法。通常,多糖纯化需要两种或更多种方法的组合来优化结果。

多糖具有各种各样的组分,复杂的结构和大分子量,因此通常从以下四个方面分析它们。

1)糖含量测定

为了确定样品中的糖含量,通常使用显影剂 - 硫酸法。单糖,多糖和它们的衍生物在硫酸的作用下水解为单糖,并迅速脱水以形成醛衍生物,其用酚醛化合物,芳族胺浓缩成色化合物。通过比色量化间接确定多糖的含量。这些方法简单,快速,敏感,具有良好的色彩稳定性。

2)分子量测定

没有绝对方法来确定多糖的分子量,因此通常使用统计平均值的方法。过去常用的渗透压方法,端部方法,粘度法和光散射法,但操作是复杂的并且造成错误。目前,更常用的方法是凝胶过滤和高效液相色谱。这两种方法必须使用已知分子量的标准多糖作为参考。对于分子量小于50,000的多糖,可以使用质谱。

3)组分确定

多糖组成分析方法通常可分为:传统化学分析,物理分析(仪器分析)和生物分析。其中,化学分析包括部分或完全的酸水解,中和和过滤。在末端,纸张色谱(PC),薄层色谱(TLC),气相色谱(GC),液相色谱(HPLC)或离子色谱法被实施用于分析。许多广泛使用的仪器分析包括分光光度法,红外光谱,核磁共振,GC和质谱(MS)。

4)结构确定

多糖具有比蛋白质更复杂的大分子结构。各种单糖,连接方法和分支链的复杂性使得结构测定困难。目前,主要结构是多糖结构测定的靶标,主要分析多糖的多糖,型,比例和单糖的连接顺序,以及糖苷键的构型。常见的结构分析方法是氧化,史密斯降解和甲基化反应。近年来,紫外线等许多先进仪器大大提高了分析。

参考
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