肠道微生物群是细菌、真菌、病毒和原生动物的总集合,以及它们存在于胃肠道(GIT)中的全部遗传物质。GIT中的微生物可能主要是共生的,而其他微生物偶尔是致病的,这导致了潜在的肠道微生物-宿主相互作用的探索。肠道微生物群在营养物质和矿物质的吸收、酶的合成、维生素和氨基酸的代谢以及短链脂肪酸(SCFAs)的产生方面发挥着至关重要的作用。这些相互作用的总和对免疫、代谢和神经内分泌反应有迫在眉睫的影响。例如,发酵的副产物如丙酸、醋酸和丁酸提高了上皮屏障的完整性,提供了对病原体的保护,并促进了上皮细胞的功能。在研究中,可以通过western blot程序鉴定特定蛋白的存在。
Western Blot (WB)是一种分离、鉴定、检测和分析蛋白质的方法。它包括通过凝胶电泳分离蛋白质混合物,然后将它们转移或印迹到膜上,在膜上它们可以通过标记来显示,标记是针对感兴趣的蛋白质的抗体。Towbin等人在1979年首次描述了这一过程,即在电泳后将蛋白质从聚丙烯酰胺凝胶转移到硝化纤维素薄片,从而准确获得凝胶图案。图1显示了蛋白质分离和可视化的western blot程序的重点部分。
图1所示。western blotting技术示意图(Mishra et al., 2017)
Western Blot在肠道微生物组研究中的应用在Metaprootomics领域,是微生物蛋白质组的研究以及肠道微生物组的研究与宿主相互作用。单细胞蛋白质印迹可以在大约2000个细胞的复杂群体内同时暴露细胞对细胞变化。多种蛋白质的鉴定使研究人员能够保持肠道微生物组的功能特征和活性。此外,已显示由肠道微生物组产生的代谢物影响生理学并改变宿主的肠道渗透性。肠道微生物组中一些蛋白质或代谢物的存在或不存在可能与疾病反应或宿主健康的改善相关(Ashman等,2019)。然而,当抗体易于使用时,蛋白质印迹仅适用于蛋白质丰度和抗体敏感性,并且在确认生物相关结果时。在实施Western印迹时,低蛋白质丰度和不可用的抗体是不利的。通过创意蛋白质组学提供的自动西式服务,可以最大限度地减少免疫印迹程序的弱点。
创意蛋白质组学为样品提供低至5μL体积的蛋白质检测和0.2μg/μl浓度。信号响应仍然向下展示到纳米图中的样品的象形图。该样本的完整分析报告包含在服务中,具有可选的标准曲线,用于额外费用。自动Western服务程序如下所示。
创意蛋白质组学“自动免疫检测服务使用高度精确和最先进的毛细管免疫检测系统,配有大量预先验证的抗体库,或者你也可以发送自己的抗体。”创新蛋白质组是高质量蛋白质和抗体阵列技术和测序技术的先驱。如果您想了解更多关于我们的western blotting服务或排序服务的信息,请访问我们的网站联系我们.
参考
1.肠道微生物学。成人短肠综合征,2019,45-54。
2.处理程序,D.,Pascovici,D.,Mirozaei,M。,等等。定量蛋白质组学数据验证的艺术.蛋白质组学,2018年。
3.Western blot:技术、理论和故障排除。北美医学科学, 2012,4(9), 429 - 434。
4.蛋白质的纯化与分析:新一代蛋白质印迹技术。蛋白质组学专家评论.2017,14(11),1037-1053。
*只供研究用途。不用于诊断程序。