草酰乙酸(也称为草酸或OAA)是一种四碳二羧酸,在糖异生、氨基酸代谢和柠檬酸循环等多种代谢途径中起重要作用。OAA由丙酮酸通过丙酮酸羧化酶合成,随后通过磷酸烯醇丙酮酸羧化激酶转化为磷酸烯醇丙酮酸,这是糖异生的重要步骤。OAA也可以转化为天冬氨酸,天冬氨酸是几种氨基酸的前体,包括精氨酸、蛋氨酸和赖氨酸。OAA还参与苹果酸-天冬氨酸穿梭,在氧化磷酸化过程中将还原性等价物通过线粒体膜转移。
草酰乙酸的分子结构
Creative Proteomics提供多种服务来支持草酰乙酸代谢分析,包括样品制备,LC-MS分析和数据分析。
LC-MS是分析草酰乙酸最常用的色谱方法。在LC-MS中,使用液相色谱系统将OAA从样品中的其他化合物中分离出来,然后由质谱仪检测。
选择液相色谱系统的固定相材料为填充C18或C8的柱。通过液相色谱分离后,化合物被引入质谱仪,在那里它们被电离和检测。质谱仪测量离子的质荷比(m/z),提供样品中化合物的身份和丰度的信息。
LC-MS可以在多种模式下进行OAA分析,包括选择离子监测(SIM)和多反应监测(MRM)。SIM模式测量的是OAA离子的特定m/z值,MRM模式测量的是OAA前体离子和产物离子对应的两个特定m/z值。MRM模式比SIM模式具有更高的灵敏度和特异性,是首选的OAA分析模式。
为保证定量准确、精确,LC-MS分析中常用稳定同位素标记内标。内标具有类似于OAA的化学结构,但包含一个稳定的同位素标签,允许对样品制备和仪器性能的变化进行准确的定量和校正。
葡萄糖靶向代谢组学技术路线
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参考文献
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