色谱法的基本原理
当溶液混合物中的组分在流动相中移动或移动样品的材料时，这些组件通过固定相。每个部件的尺寸和强度的差异导致组件的停留时间差异从固定阶段流出。
色谱的类型
根据不同的分离机制，色谱可分为五种类型：吸附，分布，交换，排除和亲和力。色谱分离方法包括吸附色谱，键合相色谱，离子交换色谱，亲和层析和尺寸排阻色谱。
色谱法的色谱法（Broekaert J.等，2015）。
几种色谱分离技术的比较
亲和色谱是色谱分离技术的一个重要分支。它是一种利用固定相的结合特性吸附目标产物，实现分离纯化的液相色谱方法。例如,特定的酶之间的相互作用和矩阵(或抑制剂),抗原和抗体,激素和受体,外源凝集素和核酸碱基对,等可以用来形成一个相互作用与不溶性物质的支持,可以用作色谱固定相。然后，从复杂混合物中可逆地拦截另一方，以达到纯化的目的。目前，亲和层析技术已广泛应用于生物分子的分离纯化。它是分离纯化生物大分子，如结合蛋白、酶、抑制剂、抗原、抗体、激素、激素受体、糖蛋白、核酸、多糖等的最重要方法之一。
蛋白质纯化的亲和色谱法的平衡（1），吸附/洗涤（2）和解吸（3）步骤的示意图（Luana等，2012）。
尺寸排阻色谱(SEC)，又称凝胶色谱，是利用分子筛使大小和数量不同的分子，根据各组分排阻能力的不同来完成被分离组分的分离。小分子量化合物可进入孔隙，停留时间长;而大分子量化合物则不能进入孔隙，而是继续随流动相流动。当洗脱液为水溶液或缓冲液时，称为凝胶过滤色谱(GFC)，在生物领域应用较多;当有机溶剂作为洗脱剂时，称为凝胶渗透色谱(GPC)，广泛应用于聚合物领域。大小排阻色谱法常用于分离聚合物化合物，如组织提取物、多肽、蛋白质和核酸。
凝胶过滤色谱是基于蛋白质的分子量或分子形状的差异。当样品从柱顶向下移动时，大的蛋白质分子无法进入凝胶颗粒而被迅速洗脱;而较小的蛋白质分子可以进入凝胶颗粒，且较小的蛋白质进入凝胶的滞留时间不同。分子量越大，洗脱时间越早。不同分子大小的蛋白质被分离。
根据分离组分在流动相和固定相中的溶解度不同，对组分进行分离。这种方法使用一种特殊的液体物质涂覆在载体表面，或与载体表面化学结合形成固定相。涂层固定(第一种操作方法)现在很少使用。目前工业上主要采用化学键合固定相，如C18、C8、氨基柱、氰基柱、苯基柱等。液-液相色谱按固定相和流动相的类型可分为正相色谱(NPC)和反相色谱(RPC)。随着柱填料的快速发展，反相色谱的应用范围逐渐扩大，现已应用于一些非极性样品或易解离样品的分析。
吸附色谱法使用固体吸附剂将组分分离在混合物中。常用的吸附剂是硅胶或氧化铝。该方法基于固定的相对分量吸附力的尺寸，以分离每个组分。整个过程取决于吸附 - 解吸的平衡。该分离方法适用于分子量为200-1000的分离异构体，并分离非离子化合物。限制的是离子化合物的分离容易发生尾矿。
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参考
1.微流体设备中基于颗粒的液相色谱分离技术的研究进展。分析Chimica学报，2018年。
2. Broekaert，J.A.C.丹尼尔C. Harris。定量化学分析，第9次。分析和生物分析化学，2015（407）：8943-8944。
3. Luana Cassandra Breitenbach Barroso Coelho，AndréaSantos，Maria T.S.Correia，等．亲和层析法纯化蛋白质Intech开放, 2012年。
4.Wong Min-Liang。脱掉衬衫来促进分离。自然、2017、543(7646):491 - 491。