氨基酸2,6-二氨基氨基酸(DAPA)是细菌细胞壁中的独特组分,因此可以用作测量这种生物材料中的细菌质量含量作为进料或消化道含量的间接和特异性指标反刍动物。此外,DAPA的类似物2,6-二氨基-3-羟基硫酸与一些二氨基丙烯酸一起发生在某些放射素的细胞壁粘液肽中。对于其发现,HOARE和WORKS分离出从AMPullariella Normalis的一些放射素的水解产物中识别的色谱慢移动组分。结果表明,检测到的分析物是2,6-二氨基-3-羟基硫酸。该化合物存在四对光学对映体,并且通过斯图尔特(1961)合成这些外消旋对,并根据三个不对称中心的相对配置鉴定为A,B,C和D(如图1所示)。此外,当通过合成的异构体比较来自Ampullariella Normalis的化合物的性质时,表明该化合物是异构体B.
图1. 2,6-二氨基-3-羟基纤维酸异构体的构型。
将这些组分转化为二- dnp衍生物,并用色谱法进行分离。因此,测定了不同物种细胞壁中存在的相对比例。从而间接检测细菌质量含量。
用于定量DAPA和2,6-二氨基-3-羟基硫酸的传统方法是离子交换色谱(IEC),然后是茚三酮反应。该方法可靠,氨基酸的分辨率合理,但分析时间长,具有相当有限的可检测性(C.a.150 pmol)。此外,对于这种分析方法,需要昂贵的氨基酸分析仪,并且分析样品中的高水平蛋氨酸对该测定产生很大影响。另一种方法是使用炭和阴离子树脂柱,其更便宜,但劳动密集并对来自脯氨酸的干扰敏感。
薄层色谱(TLC)用于在生物材料中对DAPA的定量分析,近年来由于其灵敏度,准确性和可靠性而广泛受欢迎。在创造性蛋白质组学中,通过TLC在纤维素板上检查全细胞水解产物(4N HCl,100℃,16小时),用于存在DAPA异构体或OH-DAP。
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