Thermo Scientific推出了侧桥融合Lumos Tribriat质谱仪(图1),可用于晚期蛋白质组学,代谢组合和生物牧场。该质谱仪是具有增强灵敏度的行业领先的高性能质谱仪。它包含三个质量分析仪,四极,露珠和线性离子阱(点亮)。
图1. orbitrap Fusion Lumos质谱仪
锻工融合钻孔质谱仪的结构
图2。轨道rap聚变荧光三联质谱计原理图
用液相色谱仪(LC)塔分离后,化合物通过样品转移线并进入质谱仪(MS)以进行电离和分析。MS可以通过执行MS提供有关化合物的质量计量比(M / Z)的信息和定量信息。n实验。锻工融合Lumos Tribrim质谱仪的基本结构包括离子源,离子光学,质量分析仪和检测器。接下来,将引入每个部分的特征和角色。
离子源
连接LC的离子源为大气压电离(API)。API源作为LC和MS之间的接口,包括以下电离技术:加热电喷雾电离(H-ESI)、大气压化学电离(APCI)和大气压光电电离(APPI)。除原料药源外,还有第二离子源(RIS),位于原料药源界面,就在电动离子漏斗之后。
离子光学器件
离子光学焦点并加速气相样品离子进入质量分析仪。它包括MP00离子光学器件,MP0离子光学,MP1离子光学器件,弯曲的线性陷阱(C-Trap),离子路由多极(IRM),MP3离子光学器件和DC偏移电压。MP00离子光学器件包括MP00 RF镜头和L0镜头,位于API源接口和MP0离子光学之间。MP0离子光学器件,也称为有源光束导向器(ABG),从MP00离子光学器件沿着中心轴传输来自MP00离子光学器件的离子到四极轴。通过防止中性物质和高速簇进入四极杆,90度弧可以减少噪声。作为离子传输装置的MP1离子光学器件,通过MS将射频(RF)电压施加到杆的方式向C-TRAP传输离子,以产生导向离子沿轴线的电场多极。进入C-Trap后,离子通过与氮碰撞气体碰撞而失去动能,并束缚到C-Trap的中心轴线。IRM含有一个直的多极,其内部安装在金属管内,直接瞄准C-Trap。潜在的梯度施加到多孔上以提供快速提取离子。 The MP3 ion optics can transmit ions from the IRM to the dual-pressure LIT through the way that RF voltage is applied to the rods to generate an electric field that guides the ions along the axis of the multipole.
群众分析仪
壁图融合Lumos MS包含三种质量分析仪,包括四极,露天,灯具和点燃。
四极质谱分析仪(Q1)包含四根圆形棒。MS向棒施加射频电压和直流偏置电压。在产生电场的四极杆上施加可变幅度的射频电压和直流电压时,电场可以使离子以特定的m/z稳定振荡,其他离子则不稳定振荡。即,Q1作为质量过滤器,使选定的离子通过棒。当它只适用于射频电压时,四极作为离子传输器件。
轴向对称Orbitrap质量分析仪包含一个纺锤形的中心电极,周围是一对钟形的外部电极。运动的离子能被困在静电场中。离子在轨道rap中所经历的静电场迫使它们以复杂的螺旋模式移动。这些振荡的轴向分量可以被电极的两半检测为图像电流。采用傅里叶变换将图像电流转换为质谱。
图3。轨道rap细胞的示意图
LIT质谱分析仪是一种双细胞、二维的LIT质谱分析仪,由前传递透镜(TL1)、高压LIT质谱池、中心传递透镜(TL2)、低压LIT质谱池和后传递透镜(TL3)组成。质谱仪单元内部是精密加工和精确对齐的双曲杆的正方形阵列,有三个部分(前面、中间和后面部分)。
LIT质谱分析仪有几个步骤,包括离子存储、离子隔离、碰撞诱导解离(CID)和离子扫描出。SIM或MSn,LIT质量分析器将离子隔离波形电压用主交流电压的斜坡施加到新的存储电压,除了所选的M / Z之外的所有离子。另外,对于msn,LIT质量分析仪将共振激励AC电压施加到X杆以引起CID。为了扫描离子,主RF电压从低电压升高到高电压,并且同时将谐振喷射交流电压施加到X杆以便于喷射。随着主RF电压的增加,增加M / Z值的离子变得不稳定并通过X杆中的槽弹出。
图4。A)轨道rap聚变Lumos ms中的线性离子阱(Linear ion trap)
离子检测系统
壁图融合Lumos MS具有高灵敏度和轴外离子检测系统。检测系统包含两个转换Dynode和一个电子乘法器。它产生高信噪比(S / N),其与检测到的离子数量成比例,并且能够在正极和负离子的操作模式之间实现电压极性切换。
轨道rap聚变Lumos MS扫描类型
女士扫描
质谱扫描(或全扫描质谱)相当于一个单一的质量分析阶段。在这种扫描类型中,离子源形成的离子存储在IRM中。然后,这些离子被转移到轨道rap或LIT质量分析仪,在指定的质量范围内产生可观测离子的全质谱。质谱扫描可用于定性和定量分析。这种扫描类型有助于确定化合物的分子量和强度。
多发性硬化症2扫描和女士n扫描
女士2扫描选择MS/MS质谱分析。在MS/MS扫描的第一阶段,可以选择四极杆或离子阱来选择离子。然后,选择的离子在IRM中转移到高能碰撞解离(HCD),或转移到LIT的CID,电子转移解离(ETD),或UVPD。在MS/MS扫描的第二阶段,产物离子被转移到轨道阱或LIT中进行分析和检测。的女士n扫描,N的扫描功率通常为2至10,这意味着它涉及2-10个质量分析阶段。每个阶段都包含离子选择步骤。当扫描功率较高时,可以获得化合物的结构越多的结构。
SIM扫描
所选的离子监测(SIM)是一种质量分析的单个阶段,其可以监测特定的离子或一组离子。在这种扫描型中,由圈纹或点燃的射线选择和检测定义的M / Z范围中的离子,以产生SIM的质谱。
orbitrap Fusion Lumos MS中的最新技术
Easy-IC选项。壁图融合Lumos MS具有第二离子源(RIS),位于电动离子漏斗之后的API源界面中。此内部校准可以将M / Z分配精度提高到小于1ppm。RIS产生内部校准离子,用于正面和负模式中MS扫描的实时质量校准。
EASY-ETD选项。ETD是一种通过将电子转移到多重带电气体分子上而分裂它们的解离方法。ETD和EThcD HD模式是轨道rap Fusion Lumos MS技术,用于提高ETD光谱的探测限和动态范围。
紫外光解离(UVPD)选项。带有UVPD的Orbitrap Fusion Lumos MS提供了一种额外和独特的MSn能力。这种新颖的碎片化模式与三重杂交平台的通用性,允许对蛋白质组学和代谢组学中的大分子和小分子进行深入的结构分析。
1,000,000 FWHM超高分辨率。超高分辨率与MSn功能和各种碎片模式允许综合表征各种分析物。
orbitrap Fusion Lumos MS的应用
orbitrap Fusion Lumos Tribrid MS具有卓越的灵敏度,选择性和多功能性,使研究人员能够获得最高质量的数据。配备最亮的离子源,最具选择性的四极,最快的离子陷阱分析仪,增强的解离技术和超高分辨率轨道分析仪,可用于许多具有挑战性的应用。
翻译后修改(PTM)分析
PTMs调节活性定位,以及与其他细胞分子如蛋白质、核酸、脂质和辅助因子的相互作用。因此,它们在功能蛋白质组学中发挥着重要作用。Orbitrap Fusion Lumos MS具有CID、HCD、ETD和EThcD等多个片段,有助于PTM分析,特别是糖基化分析。例如,ETD和EThcD可以提供糖肽骨干片段的MS/MS谱,从而实现精确的修饰位点定位。
蛋白质定量
质谱法在蛋白质定量中起重要作用。使用异质量标签的多路复用分析广泛用于蛋白质丰富的高通量定量比较。壁图融合LUMOS MS可以执行同位标签串联质量标记(TMT),这使得能够同时分析10个样品,具有改善的定量精度。这种先进的仪器提供了选择性和增强的灵敏度,以获得最大性能,同时可以保持低丰度分析的量高再现性。
完整的蛋白质分析
自上而下的蛋白质组学,通常分析完整蛋白质,通过质谱仪中的完整蛋白质的破碎,提供有关PTM,蛋白质同种型和蛋白质序列的信息。配备先进的真空技术的Orbitrap Fusion Lumos MS提供优化的条件,可改善具有完整蛋白质分析的性能。结合多样性碎片化,ETD HD的orbitrap Fusion Lumos MS可以提供改进的检测限和动态范围,导致更快的采集速率下的序列覆盖率更大。此外,它可用于具有具有重链和轻链的同位素分辨率的完整单克隆抗体的高精度质量分析。
小分子分析
由于高灵敏度和高分辨率,Orbitrap Fusion Lumos MS是一种有用的小分子识别和定量仪器。由于可以观察到精细的同位素结构,它可以用于高精度的分子公式的测定。这种直接测量消除了模式匹配估计的模糊性。此外,更亮的离子源使其达到远较低的定量水平。
Thermo Scientific Orbitrap Fusion Lumos Tribrid质谱仪具有一些先进的功能,包括一个新的API接口、先进的四极杆技术、高场轨道rap分析仪和双压力线性离子阱。独特的仪器结构可以在任何分裂阶段执行多重分离技术(如HCD和CID),并在线性离子阱或Orbitrap质谱分析仪中分析离子。在Creative Proteomics,我们可以基于Orbitrap Fusion Lumo Tribrid质谱平台提供多种服务,包括: