标签转移方法采用交联方法,通过标记与感兴趣蛋白质相互作用的蛋白质来研究蛋白质-蛋白质相互作用。该方法可用于发现新的相互作用,确认由其他技术提出的假定相互作用,并研究蛋白质复合物。此外,标签转移方法可以检测弱的,或短暂的蛋白质相互作用,往往无法检测co-immunoprecipitation,或下拉的方法.
在典型的标签转移工作流程中,首先诱饵蛋白与带有放射性、荧光或生物素标签的标签转移试剂(LTR)的活性部分发生反应;然后标记的诱饵蛋白被允许与猎物蛋白相互作用在体外形成稳定或短暂的复合物,然后暴露在紫外线下,激活交联剂上的光反应基团,然后以共价结合到猎物蛋白质上;标签转移是通过切断交联剂间隔臂释放附着的诱饵蛋白来完成的。蛋白相互作用可通过Westernblot、蛋白测序和质谱分析等多种方法进行分析。
在以前的研究中,荧光或放射性标记的芳基叠氮化物、碳烯或二苯甲酮与激素、多肽或核酸有关,并用于标记和探索以前未知的猎物蛋白质。标签转移方法已被广泛应用于这方面的核酸-蛋白相互作用的研究。虽然大多数ltr对直接标记特定的蛋白质结构域很有价值,但它们通常不适用于蛋白质的定位蛋白质相互作用网络,因为连接到交联剂上的归巢分子通常只引导交联到结合域上。
通过更新版本的标签转移策略,Creative Proteomics可以帮助您选择适合您的实验目标的交联剂,并对您感兴趣的蛋白-蛋白相互作用进行后续分析。