下拉法是一种简单、灵敏的方法在体外研究蛋白质-蛋白质相互作用(PPIs)的方法。在方法学上,拉下分析法与免疫共沉淀法相似。在实验中,它们都使用亲和配体来捕获相互作用的蛋白质。然而,共免疫沉淀法与下拉法有一定的区别。共免疫沉淀通过使用固定抗体捕获蛋白质复合物,而下拉试验通过使用纯化和标记的蛋白质作为“诱饵”结合相互作用的蛋白质。
图1.肽下拉测定的原理图。BPTF是一种蛋白质,在人类中由BPTF基因编码。HP1(异铬胺蛋白1)是表观遗传研究中的重要标志物分子。(Wysocka J.,2015)
许多蛋白质与伴侣蛋白结合或作为大型多蛋白复合物的组成部分起作用。了解这些蛋白质相互作用对我们理解生物途径和细胞功能至关重要。拉下分析法可用于定量检测这两种蛋白质,并研究蛋白质之间的相互作用。除了研究两种蛋白质的相互作用,下拉试验还可以用来检测特定蛋白质的激活状态。蛋白质的激活通常伴随着蛋白质构象的改变,诱饵选择性地结合到特定的构象上。在这种情况下,下拉试验可以用来选择性地净化活动的猎物。例如,GTPase效应器只识别活性的GTPase。因此,当使用GTPase效应物作为诱饵时,只有活性的GTPase被捕获并纯化,从而可以测量活性的GTPase的比例。
创意蛋白质组学的下拉测定服务
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有许多类型的标签作为下拉试验的诱饵,如GST、poly-His和生物素,等等.用来固定诱饵的亲和配体分别是谷胱甘肽、镍和螯合配合物和链霉亲和素。
表1。诱饵的标签类型
诱饵标签 | 亲和力配体 |
---|---|
谷胱甘肽S-transferase(销售税) | 谷胱甘肽 |
Poly-histidine | 镍或钴螯合物复合物 |
生物素 | 链霉亲和素 |
我们的优势
应用程序
创意蛋白质组学可以为蛋白质下拉测定提供专业服务。我们拥有最先进的仪器和技术服务团体,以高质量和高效率进行整个程序。随着每个项目都有不同的要求,请联系我们的专家讨论您的特定需求。
引用:
1.贾S Z。等.使用双荧光素酶报告后拉测系统的蛋白质 - 蛋白质相互作用的相对定量。《公共科学图书馆•综合》.2011;6 (10): e26414。
2. Wysocka J.使用肽下拉测定识别新型蛋白质识别组蛋白修饰。方法.2015;40(4): 339 - 343。