Creative Proteomics为客户提供端到端解决方案蛋白质凝胶服务包括SDS-PAGE、IEF和本机PAGE分析。
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聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)是分离大分子DNA、RNA和蛋白质最常用的技术之一
电泳通常是施加电场使带电分子通过溶液的过程。在这种技术中，带电分子的迁移率与它的净电荷和它通过的溶液的阻力成正比。
十二烷基硫酸钠(SDS)是一种阴离子洗涤剂，溶解时其分子在较宽的pH范围内具有净负电荷。多肽链根据SDS的相对分子质量与一定数量的SDS结合，SDS上的负电荷破坏了大部分蛋白质的复杂结构，特别是在用DTT等试剂还原后。然后，蛋白质变成带负电荷的杆状大分子，具有类似的流体力学性质，其流动性只取决于它们的分子质量。
然而，当将蛋白质混合物添加到凝胶上时，最小的蛋白质甚至在整个样本进入凝胶之前就会开始通过凝胶。为了实现更好的分离，整个样品被压缩到凝胶界面上最窄的可能的带中，这是通过一种被称为堆叠凝胶的巧妙技巧，下面是它的工作原理。
聚丙烯酰胺凝胶分为两层，较大的“分解”凝胶在底部，较窄的“堆积”凝胶在顶部。凝胶顶部和底部的储液器含有一种由甘氨酸制成并调整到pH为8的缓冲液。3.堆积凝胶的pH值为6。8，而溶解凝胶的pH为8。8、两者都含有一种由盐酸制成的缓冲液。
在电泳过程中，电流会通过凝胶从一个储层流到另一个储层，由带负电荷的分子携带。因为在pH值为8时，只有10%的甘氨酸分子带负电荷。3，所以这里的电流主要是由堆积缓冲液中的Cl-携带的，Cl-离子在蛋白质前面的堆积凝胶底部堆积。结果是，在堆叠凝胶中，sds包被的蛋白质分子被夹在上面的甘氨酸分子和下面的Cl-分子之间，并被压缩成比最初装载的体积小得多的条带。
随着电流的继续流动，蛋白质进入溶解凝胶。然后将甘氨酸分子溶解在pH为8的凝胶缓冲液中。8变成带负电的并且移动得非常快，几乎赶上Cl-离子，把蛋白质甩在后面。正是在这一点上，当蛋白质进入溶解凝胶时，它们带着电流沿着Cl-和甘氨酸阴离子的轨迹前进，而它们的流动性仅是分子大小的功能。
一旦SDS-PAGE凝胶运行，你需要固定凝胶中的蛋白质，这样当你染色凝胶时它们就不会出来。25%的水醋酸是一种很好的固定剂，因为它可以保持蛋白质的变性。这种凝胶通常用库马西蓝染料R250染色，固定剂和染料可以在甲醇作为溶剂的同一溶液中制备。然后凝胶被去除和干燥。
SDS-PAGE广泛应用于蛋白质组学分析，包括蛋白质大小测定，蛋白质识别、样品纯度分析、二硫键鉴定、蛋白定量。
IEF
等电聚焦(IEF)是一种基于蛋白质的分离的电泳技术等电点(π)。pI是蛋白质不带净电荷的pH值，因此在电场中不会进一步移动。
在IEF中，分离是在含有两性电解质混合物的聚丙烯酰胺或琼脂糖凝胶板中进行的，两性电解质在凝胶中移动，在电场作用下产生pH梯度。
对于IEF分析，要聚焦的分子分布在确定的pH梯度的培养基上。电流通过介质，形成“正”阳极和“负”阴极端。带负电荷的分子通过pH梯度向“正极”端移动，而带正电荷的分子则向“负极”端移动。当一个粒子向其电荷相反的极移动时，当它们接近特定的pI时，它被固定在pH梯度中。
结果，蛋白质集中成清晰的固定带，每个蛋白质定位在与其pI相对应的pH梯度上的一点。IEF技术具有极高的分辨率，甚至只有一个电荷不同的蛋白质也能被分成不同的条带。