介绍
Far-WesternBlot是一种基于Westernblot技术的分子生物学方法，用于检测体外蛋白质-蛋白质相互作用，特别是用于检测不需要感兴趣蛋白质的天然结构的相互作用。
远Western blot技术的整体工作流程与Western blotting相似，只是Western blotting中需要抗体来探测靶蛋白。而在远西方分析中，不需要抗体，而是使用纯化和标记的“诱饵”蛋白来探测和检测膜上的目标“猎物”蛋白。在Western blot和far-Western blot中，蛋白质分别通过SDS凝胶或天然PAGE凝胶分离，然后将蛋白质从凝胶转移到膜上。转移后，用经验浓度的牛血清白蛋白阻塞膜。然后膜上的蛋白质变性和再变性，这是一个可选的步骤，取决于实验所需的结合条件。然后用已知的高度纯化的诱饵蛋白探测膜。随着诱饵与猎物蛋白质的反应，一个依赖于所使用的诱饵蛋白质的检测系统可以检测到与猎物蛋白质相对应的波段信号。
远西印迹分析的关键因素
尽管远western印迹是一种方便的方法，已被广泛应用于研究蛋白质-蛋白质相互作用，但在保存蛋白质的原生构象和相互作用条件时必须注意。关于远西印迹有一些问题。首先，对于在SDS凝胶中分离的蛋白质，这是一种变性条件，蛋白质是变性的。有可能变性蛋白不与诱饵蛋白相互作用，导致无法识别相互作用。其次，蛋白质在结合实验前已发生变性和变性，这也可能导致蛋白质构象发生潜在变化，影响目标蛋白与诱饵蛋白的结合亲和力。第三，如果binding motif的暴露受到其他因素的调控，则可能存在binding motif被埋没在内部而无法被诱饵触及，从而导致无法检测到相互作用。更棘手的是，以非原生构象呈现的蛋白质可能以新的、人工的方式相互作用，导致假阳性相互作用。创意蛋白质组学可以根据您的需要设计实验，并评估可能影响结果的潜在因素。我们承诺数据可靠，重现性高。
远西印迹分析的特点
- 体外蛋白质相互作用研究
- 映射蛋白质结合域
- 比较蛋白质结合亲和力
- 对抗体无要求
远western Blot分析流程
- 蛋白质用SDS或天然PAGE进行定量和分离
- 将蛋白质从凝胶转移到膜上
- 转移蛋白变性和再变性以完全暴露结合基序
- 然后用BSA缓冲液阻塞膜
- 膜与纯化的饵料蛋白孵育
- 检测诱饵蛋白信号
- 图像分析和报告提交
我们的远西印迹方法包括:
- 用放射性诱饵蛋白直接检测猎物蛋白;
- 用诱饵蛋白特异性抗体间接检测;
- 用融合标记诱饵蛋白标签特异性抗体间接检测;
- 用生物素化饵蛋白和酶偶联亲和素或链霉亲和素间接检测。
排序过程：
