自发反应突变计数过低的原因是什么?我该怎么处理呢?
可能的原因:
- 涉及到新一批琼脂培养基的毒性。
- 使用了错误的测试细菌菌株。
- 在顶部琼脂中加入的组氨酸太少。
解决方案:
- 每一批新的琼脂培养基在使用前都应例行检查其毒性。
- 重复该菌株的测定，如有必要，重新分离该菌株，并选择自发还原突变率正常的克隆。
- 使用含有正确浓度组氨酸的顶部琼脂。
自发恢复突变计数过高的原因是什么?对此我们能做些什么呢?
可能的原因:
- 将大部分组氨酸添加到最上面的琼脂中。
- 从冷冻培养物种中接种大量His+细菌(累积效应)。
- 培养皿可能已经用环氧乙烷消毒过，环氧乙烷的残留可以引起TA1535和TA100的突变。
- 可能存在污染。
解决方案:
- 准备一个新的顶部琼脂，并确保组氨酸浓度合适。也有可能测试样本物种含有组氨酸，这通常发生在测试生物液体(如尿液)或与食品相关的项目(如蛋白质和肉提取物)时。
- 检查几种冷冻培养中自发恢复突变的数量。如果问题仍然存在，重新分离菌株并选择具有正常自发还原突变率的克隆。
- 使用前使用辐照和消毒板或在生物通风柜中放置一天。
- 重新分离菌株。
如果阳性对照药不起作用怎么办?
可能的原因:
- 可能使用了错误的阳性对照化学品。
- 这种化学品在储存期间质量可能已经变质。
- 代谢激活系统一直被忽视。
- 代谢激活系统失去了它的功能。
- 使用了错误的试验菌株。
解决方案:
- 再次检查阳性对照化学品，以确保使用了正确的试验菌株。
- 准备一批新的阳性对照药剂。
- 重新测试阳性对照化学品，以确保代谢激活系统正在使用。如果问题仍然存在，可能是S9组件或辅助因子不活跃。
- 准备一批新的辅助因子进行测试。如果问题仍然存在，请使用新一批s9级组件。
- 确认所使用的菌株正确。
如果盘子上的可逆突变数量过低怎么办?
可能的原因:
- 这些化学物质毒性太大了。
- 顶部琼脂温度过高。
- 溶剂是有毒的。
解决方案:
- 当这种化学物质毒性很大时，大多数细菌会被杀死，导致没有足够的细菌存活下来突变为非组氨酸依赖。应使用较低剂量的化学品。
- 顶部琼脂的温度不超过48℃，顶部琼脂应保持在43℃。
- 如果溶剂有毒，并且正在使用预培养方法，则使用平板掺杂法进行测试。如果问题仍然存在，尝试另一种溶剂，或稀释溶剂以降低其毒性。
大多数菌落集中在盘子的一半有什么问题?
可能原因:底部和/或顶部琼脂层在凝固时呈一定角度放置。
解决方法:板倒置时应水平放置。
