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代谢组学实验方案问答

代谢组学可以检测到哪些样本?

答:代谢组学主要研究小分子代谢物(MW<1000)作为各种代谢途径的底物和产物。可检测的样品主要是尿液、血浆或血清、唾液、细胞和组织提取物。我们还做过植物、真菌、微生物提取、脑脊液、淋巴液、昆虫血淋巴、羊水、卵泡液、膝关节滑膜液、眼泪、精液、粪便和肠道内容物提取等。

我需要为代谢组学建立生物复制吗?应该建立多少个生物复制?

答:与基因和蛋白质相比,代谢物处于生命活动的下游,具有较高的动态波动。因此,为了减少个体差异,有必要建立多次生物重复,以增加数据的可靠性和说服力。

例如,植物和微生物可重复6-8次,动物可重复10次或更多次。然而,临床要求要高得多,因为人类的个体差异非常大,通常建议进行30个或更多的生物重复。

代谢组学能检测到的代谢物的最低水平是多少?

答:不同的检测平台有不同的灵敏度。LC-MS的灵敏度最高,可达到fM级。对于相同含量的不同物质,质谱的电离效率和信号响应强度因其自身的化学性质而有很大差异。一种物质的检测灵敏度与其自身的化学性质有关。化学性质的影响主要表现在电离效率和质谱碎片行为。因此,相同含量的不同物质可能被一种检测到,而不是另一种。

如果两组最终采集的样本数不一样,这样比较两组是否可以?

是的。更重要的是,每组的生物重复数量都足够高,而不是两组的比较分析。

同一批非靶向代谢组学样本能否在较长时间内分批测试?

A:是的,但是不建议超过两周的批次。这是因为仪器的响应会随着时间的变化而有所不同,并且在不同的时间测试相同数量的物质的峰值面积是不同的。非靶向代谢组学分析计算基于峰值面积的含量变化乘法。两个或多个批次的检测会导致计算结果出现较大误差。

*仅供研究使用。不用于诊断程序。
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