材料
试剂级和分析级硫酸锌、咪唑、乙酸和碳酸钠均来自Sigma (St. Louis, MO)。
a)平衡液(1X): 0.2 M咪唑，0.1% (w/v) SDS。
b)显影剂(1X): 0.3 M硫酸锌。
c)反染色凝胶储存液(1X): 0.5% (w/v)碳酸钠。
所有溶液配制成10倍浓缩原液，在室温下保存，并在蒸馏水中稀释(1:10)，在使用前得到工作浓度(1X)。
方法
1.聚丙烯酰胺凝胶电泳
a) SDS-PAGE按照Laemmli方法进行，原生PAGE按照Laemmli方法进行，但凝胶和电泳溶液中不含SDS。
b)常规琼脂糖凝胶电泳在0.8%琼脂糖凝胶中进行，使用pH 8.0的Tris-acetate作为凝胶和运行缓冲液。
2.SDS-PAGE和Native PAGE凝胶的标准反染色
下面的反向染色方法检测标准聚丙烯酰胺凝胶中的蛋白质。所有的孵育都是在塑料或玻璃托盘中进行的，底部是透明的。相应的染色/储存溶液的体积必须足以覆盖凝胶(一个微型凝胶通常为50 mL [10 cm × 7 cm × 0.75 mm])。
a)电泳后，凝胶在平衡液中孵育15分钟。
b)为了显影，丢弃咪唑溶液，凝胶在显影液中浸泡30 - 40s。注意:此步骤不能延长超过45秒，否则会出现条带过度染色和图像丢失。通过倒出显影剂溶液并在多余的水中冲洗凝胶三到五次(约1分钟)来防止过度染色。
完成反向染色程序后，凝胶就可以照相记录了。这项任务的理想设置包括将凝胶放在玻璃板上，玻璃板在黑色表面上方几厘米处，并从侧面照射。虽然SDS-PAGE是一种常用的高分辨率分离复杂蛋白质混合物的方法，但在电泳过程中应避免蛋白质变性或大分子复合物的破坏。在这些情况下，采用天然PAGE或琼脂糖凝胶电泳，不使用SDS。然而，当使用反向染色时，重要的是要避开SDS。幸运的是，已经开发了两种技术来规避这个问题。
