2-D PAGE植物蛋白样品制备方法在线调查

1全植物组织提取

a)植物组织样品应用杵和臼在液氮中预冷磨成细粉。
b)测定1.5 ml埃彭多夫管的重量，然后用液氮冷却。
c)将(步骤1)粉末放入埃彭多夫管中并再次称重。
d)在粉末中加入A溶液，提取蛋白质。溶液与粉末的比例应为1比2 (v/w)。旋涡立即将粉末与溶液混合。
e)添加固体硫酸鱼精蛋白(1mg /mL)。
f)将混合物在冰上孵育15分钟，偶有涡流。
g)离心(13000 g, 2°C) 15分钟。将上清转移到新的埃彭多夫管中，然后加入固体尿素至终浓度为9 m。室温下间歇旋转混合物5分钟。
h)蛋白-尿素提取物可立即使用或分成70 μ l的每份，在-80℃保存，待进行一维IEF凝胶电泳时使用。

2细胞间液的提取

2.1.细胞间液的收集

a)将整片叶子(100毫克至1克，新鲜重量)浸泡在蒸馏水中，放入与真空泵相连的干燥器内的烧杯中。当叶片呈现有光泽的墨绿色外观时，判断叶片材料的真空过滤完成。
b)用纸巾轻轻吸干叶子，然后将叶子放入2.5 ml的塑料注射器桶中，该注射器桶应放在埃本多夫管的顶部(盖已切断)。然后将整个注射器-埃彭多夫管组件放入30ml离心管中。
c)离心(3000g, 4℃)10min。epppendorf管收集细胞间液。它可以立即使用或储存在-80°C，直到需要进行一维IEF凝胶电泳。

2.2.蛋白质的提取

a)向1 vol细胞间液中加入5 vol溶液B(见注释4和5)，在-20°C下孵育过夜。
b)离心(15000 g, 4℃)15分钟。丢弃上清，在室温下真空干燥。
c)重新加入至少50 μL的c溶液，强力涡旋，冰孵育30分钟。
d)离心(14000g, 4℃)15min。丢弃不溶性物质;等量的上清液应立即使用，并直接装入一维IEF凝胶。